इस प्रोटोकॉल chemoeffectors के स्थिर एकाग्रता gradients में बैक्टीरिया chemotaxis की जांच के लिए एक microfluidic डिवाइस के विकास का वर्णन करता है.
Abstract
Chemotaxis बैक्टीरिया attractant रसायनों के सूत्रों के दृष्टिकोण करने के लिए या बचाने वाली क्रीम रसायनों के स्रोतों से बचने के लिए अनुमति देता है. जीवाणु लगातार एकाग्रता वर्तमान एकाग्रता तुलना द्वारा विशिष्ट chemoeffectors की एकाग्रता की निगरानी कुछ ही सेकंड पहले पता लगाया. इस आंदोलन की तुलना शुद्ध दिशा निर्धारित करता है. हालांकि कई, प्रतिस्पर्धा gradients अक्सर प्रकृति में रह, बैक्टीरियल chemotaxis की जांच करने के लिए परंपरागत दृष्टिकोण attractants और repellents के एकाग्रता gradients के जवाब में प्रवास बढ़ाता के लिए suboptimal कर रहे हैं. यहाँ, हम बैक्टीरिया के लिए सटीक और स्थिर chemoeffectors की एकाग्रता gradients को पेश करने और मात्रात्मक उनके लागू ढाल के जवाब की जांच के लिए एक microfluidic chemotaxis मॉडल के विकास का वर्णन. युक्ति किसी भी वांछित पूर्ण एकाग्रता और ढाल ताकत की है कि एकाग्रता gradients में बहुमुखी है आसानी से मिश्रण वाचाल द्वारा उत्पन्न कर सकते हैं. डिवाइस की प्रतिक्रिया का उपयोग करने के लिए प्रदर्शन किया है<em> Escherichia कोलाई</em> RP437 अमीनो एसिड और निकल आयनों के gradients के लिए.
Protocol
1. सिलिकॉन मानक SU 8 1 photolithography (इस वीडियो में दिखाया गया है) का उपयोग कर स्वामी का निर्माण. मानक SU-8 photolithography तरीकों का उपयोग PDMS साँचे में ढालना है कि microfluidic नेटवर्क और chemotaxis कक्ष होता है fabricating के लिए SU-8 "मास्ट…
Discussion
chemotaxis विभाजन (सीपीसी) गुणांक और chemotaxis प्रवास गुणांक (सीएमसी) माओ एट अल5 में वर्णित के रूप में गणना की जा सकती है. यदि एक सेल उच्च एकाग्रता की ओर पर पाया जाता है, यह एक का एक मूल्य दिया जाता है, जबकि एक कम ?…
Acknowledgements
इस काम के हिस्से में राष्ट्रीय विज्ञान फाउंडेशन (0846453 CBET) द्वारा समर्थित किया गया था.
Englert, D. L., Manson, M. D., Jayaraman, A. A Microfluidic Device for Quantifying Bacterial Chemotaxis in Stable Concentration Gradients. J. Vis. Exp. (38), e1779, doi:10.3791/1779 (2010).