प्रायोगिक प्रोटोकॉल निम्नलिखित अलग प्रोटोकॉल आईआर murine दिल गैर invasively जांच में उद्देश्य माप की व्यवहार्यता स्थापित करने के लिए इस्तेमाल किया गया. बेसलाइन echocardiographic इमेजिंग ischemia-reperfusion की शल्य चिकित्सा प्रेरण (आईआर, 1 प्रोटोकॉल) जो इकोकार्डियोग्राफी द्वारा कई समय बिंदुओं पर आईआर से वसूली के दौरान किया गया था के द्वारा पीछा किया गया था. एक प्रोटोकॉल. शल्य चिकित्सा की प्रक्रिया: वाम पूर्वकाल अवरोही (लाड) धमनी आईआर पुरुष C57BL / 6 वयस्क चूहों (8 सप्ताह पुराने, 24.5 ± 1.5g, ± एसडी मतलब, Harlan टेक्नोलॉजीज में) मानक प्रयोगशाला चाउ और पीने के पानी विज्ञापन libitum के उपयोग के साथ आवास की स्थिति के तहत बनाए रखा. चूहे anesthetized थे ketamine (100 मिलीग्राम / किग्रा) और (10mg/kg) xylazine, एक गर्म शल्य चिकित्सा की मेज पर रखी एक मिश्रण की intraperitoneal इंजेक्शन का उपयोग, और endotracheally intubated. कृन्तकों के लिए उचित संवेदनाहारी विमान पैर के अंगूठे चुटकी सजगता के एक समाप्ति और श्वसन की एक धीमा द्वारा deduced है. उपकरण 70% इथेनॉल washes और autoclaving के माध्यम से निष्फल किया गया. कोई यंत्र है कि बाँझ क्षेत्र को छोड़ दिया जारी रखने का उपयोग करने से पहले 1 मिनट के लिए एक गर्म मनका साधन अजीवाणु बनानेवाला पदार्थ में डाला गया. चूहों (हार्वर्ड उपकरण, बोस्टन, MA) हवादार थे एक उचित दर और ज्वार की मात्रा में हवा – isoflurane मिश्रण का उपयोग. हृदय इलेक्ट्रोफिजियोलॉजी एक तीन लीड ईसीजी सेटअप का उपयोग सर्जरी के दौरान निगरानी किया गया था, और परिवर्तन पीसी Powerlab सॉफ्टवेयर (ई. उपकरण) का उपयोग कर दर्ज किए गए. दिल बाईं thoracotomy के माध्यम से पहुँचा था. बाएं फेफड़े pericardium के लिए उपयोग की अनुमति मुकर गया था. बाईं कर्ण – शष्कुल्ली कोरोनरी लाड धमनी है, जो 7-0 Prolene एक पतला सुई पर घुड़सवार सीवन का उपयोग कर पृथक किया गया बेनकाब करने के लिए ऊपर उठाया गया था. सीवन पीई 10-टयूबिंग की एक टुकड़ा से अधिक कड़ा किया गया था पलटवाँ ischemia प्रेरित. लाड 60 मिनट के लिए occluded था. 60 मिनट के बाद, सीवन घायल मायोकार्डियम के reperfusion के लिए अनुमति देने के लिए जारी किया गया था. सफल reperfusion पर, छाती बाधित Prolene 7-0 5-0 Prolene sutures के साथ के रूप में अच्छी तरह के रूप में त्वचा चीरा sutures के साथ बंद कर दिया गया था. सर्जरी के दौरान, शरीर का तापमान 36.7 पर बनाए रखा गया था 0.5 ± ° C एक गर्म शल्य तालिका का उपयोग कर और एक गुदा थर्मल जांच के साथ निगरानी. प्रकरण इस्कीमिक कि नेत्रहीन सराहना की जा सकती एल.वी. मायोकार्डियम का पीला रंगाई का कारण बनता है. छाती बंद sutured, और tracheal ट्यूब अपने दम पर साँस लेने के लिए माउस को सक्षम करने डिस्कनेक्ट कर दिया गया. जानवर तो अपने पिंजरे को लौट रहा था और एक गर्म 37 के लिए सेट ब्लॉक डिग्री सेल्सियस पर रखा एक बार वसूली पूरा किया गया था, पशु कृंतक मछली पालने का बाड़ा इकाई के लिए लौट रहा था echocardiographic इमेजिंग के लिए पहले. सभी प्रक्रियाओं संस्थागत प्रयोगशाला पशु की देखभाल और ओहियो स्टेट यूनिवर्सिटी के उपयोग समिति (ILACUC) द्वारा अनुमोदित किया गया. 2 प्रोटोकॉल. हृदय समारोह और दीवार गति विषमता का पता लगाने के निर्धारण के लिए एम – मोड इमेजिंग प्रोटोकॉल हृदय समारोह और दीवार गति असामान्यताएं में रेडियल और अनुदैर्ध्य परिवर्तन का आकलन करने के लिए, हम उच्च आवृत्ति, उच्च संकल्प अल्ट्रासाउंड स्कैनर (दृश्य Sonics इंक, टोरंटो, कनाडा) का उपयोग कर पूर्व IR इमेजिंग प्रदर्शन. मानक एम मोड ऐसी दीवार आयाम के रूप में इकोकार्डियोग्राफी पैरामीटर, प्रकुंचन पाद लंबा, और स्ट्रोक की मात्रा, इंजेक्शन भिन्न (एफई), भिन्नात्मक छोटा (एफएस), कार्डियक आउटपुट (CO), और प्रकुंचन और पाद लंबा में आंतरिक व्यास, पर मात्रा में उपयोग करके मूल्यांकन किया गया हर बार बिंदु (पूर्व IR, 3 दिन और 7 दिन) में निर्मित एम – मोड प्रोटोकॉल. प्रोटोकॉल 3. VevoStrain ट्रैकिंग एल्गोरिथ्म प्रोटोकॉल धब्बा बी मोड फिल्मों का अधिग्रहण और में तनाव विश्लेषण प्रदर्शन करने के लिए एल्गोरिथ्म VevoStrain बनाया प्रक्रिया का उपयोग कर अधीन थे. यह वेग, विस्थापन, तनाव, और अलग रेडियो इंटरफ़ेस जो नियंत्रण कक्ष में वांछित माउस क्लिक करके किया गया था डेटा मानों के साथ साथ इंटरैक्टिव और भूखंडों एम मोड छवियों देने में उपलब्ध कराई बटन के माध्यम से तनाव की दर के आकलन की अनुमति देता है. खींच के मूल्यांकन ट्रैकिंग धब्बा 2 – डी ग्रेस्केल सिने loops एल.वी. दृश्य कम अक्ष में> 275 फ्रेम / एस के एक फ्रेम दर पर हासिल किया गया प्रत्येक प्रयोग के लिए, कम से कम तीन लगातार हृदय चक्र दर्ज थे और एक कार्य केंद्र पर ऑफ़लाइन विश्लेषण के लिए डिजिटल एक हार्ड डिस्क पर संग्रहीत. हम एक धब्बा ट्रैकिंग Vevo2100 में शामिल एल्गोरिथ्म इस्तेमाल किया. तनाव विश्लेषण ही प्रशिक्षित पर्यवेक्षक द्वारा प्रदर्शन किया गया था. हित के क्षेत्र में न्यूनतम endocardial क्षेत्र के लिए इसी छवि पर वेंट्रिकल के एक क्रॉस सेक्शन भर मढ़ा था. सॉफ्टवेयर एल्गोरिथ्म तब स्वचालित रूप से एल.वी. दृश्य कम – अक्ष के लिए छह खंडों में विभाजित हृदय चक्र के दौरान ट्रैकिंग धब्बा. ट्रैकिंग गुणवत्ता तो नेत्रहीन का निरीक्षण किया गया था, और, अगर यह कम से कम पांच वर्गों के लिए संतोषजनक थी, अनुरेखण स्वीकार किया गया थाएड. 4 प्रोटोकॉल. डॉपलर प्रवाह माप प्रोटोकॉल Mitral वाल्व regurgitation का अध्ययन और एल.वी. सिस्टोलिक रक्तचाप (डी पी / dt) के परिवर्तन की दर की गणना, डॉपलर प्रवाह का पता लगाने प्रोटोकॉल इस्तेमाल किया गया था. इस प्रयोजन के लिए, बिजली डॉपलर रक्त प्रवाह वेग प्रोफाइल mitral वाल्व regurgitant जेट और महाधमनी जेट पर जांच रखकर हासिल किया गया. रक्त के प्रवाह वेग के इमेजिंग माप के द्वारा पीछा किया गया था चोटी और मतलब वेग चोटी, जैसे मापदंडों के मूल्यों को बनाए रखने के लिए और दबाव gradients, वेग समय अभिन्न और समय मतलब है. डी पी / dt की गणना के लिए, mitral वाल्व regurgitant वेग प्रोफ़ाइल जल्दी प्रकुंचन (वेग प्रोफ़ाइल के steepest ढलान लोड निर्भरता कम करने के लिए) और ढलान के इसी समय में वेग को मापने के लिए इस्तेमाल किया गया था. अंत में, एस Bernoulli समीकरण वेग दबाव रूपांतरण systolic दबाव में वृद्धि की दर निर्धारित करने के लिए प्रदान की है. Echocardiographic डाटा अधिग्रहण चूहे एक जागरूक राज्य में 37 के एक कमरे के तापमान पर imaged किया गया डिग्री सेल्सियस के साथ परिवेश प्रकाश व्यवस्था की कमी हुई जबकि एक प्रवण बाईं decubitus स्थिति में एक अनुभवी हैंडलर द्वारा आयोजित है. दिल 2 – डी मोड में 1.0 सेमी की गहराई की स्थापना के साथ parasternal लंबी और कम अक्ष दृश्य और ≥ 270 फ्रेम / एस के एक फ्रेम दर पर imaged किया गया था एक एम – मोड छवि 200 मिमी / एस के एक झाड़ू गति से प्राप्त किया गया था सभी माप इकोकार्डियोग्राफी की अमेरिकन सोसायटी द्वारा उपलब्ध कराए गए दिशा निर्देशों के अनुसार किया गया. इमेजिंग होश में चूहों में इलेक्ट्रोकार्डियोग्राम के अग्रानुक्रम पंजीकरण साथ प्रदर्शन किया था. एंड प्रकुंचन न्यूनतम एल.वी. क्षेत्र के रूप में परिभाषित किया गया था. कमानी एस circ और एस रेड घटता तो उपयुक्त अंत डायस्टोलिक अंक से शुरू संकेतों को एकीकृत द्वारा निर्माण किया गया और फिर औसत कमानी तनाव घटता प्राप्त करने के औसत. अंत सिस्टोलिक उपभेदों तो औसत तनाव की अवस्था से प्राप्त किया गया. प्रतिनिधि परिणाम दो आयामी फिल्में उच्च फ्रेम दर (8 kHz) में हासिल करने के लिए उच्च गुणवत्ता दौरे तनाव का अनुमान करने के लिए उपयोग किया गया. दो आयामी (तनाव छवियाँ) elastograms, समय के एक समारोह के रूप में के रूप में अच्छी तरह से तनाव प्रोफाइल मदद IR के कार्यात्मक परिणाम की सराहना करते हैं. उपर्युक्त दृष्टिकोण निम्नलिखित मानकों की विश्वसनीय पता लगाने के लिए नेतृत्व: मानक परिणाम आईआर (आमतौर पर साहित्य में रिपोर्ट) बाएं निलय संकुचन (LV) चोट और कार्यात्मक नुकसान में जिसके परिणामस्वरूप दिल में संकुचन और विश्राम impairs एल.वी. चैम्बर क्षेत्र और जन में परिवर्तन (अतिवृद्धि) दोनों पूर्व IR और दिल की धड़कन के बाद आईआर isovolumetric चरणों के एल.वी. छूट समझौता दीवार क्षेत्र वार गति रक्त का प्रवाह पैटर्न में अशांति के रूप में रंग डॉपलर फिल्मों और वेग प्रोफाइल से पता चला एल.वी. गोलाई की दिशा में आकार में परिवर्तन समझौता इंजेक्शन फ्रैक्शन तनु भिन्नात्मक छोटा अद्वितीय पोस्ट आईआर परिणाम (एक murine IR सेटिंग में पहले कभी नहीं की रिपोर्ट, लेकिन मानव में नैदानिक महत्व का हो जाता है) प्रभावी regurgitant छिद्र (ERO) वाल्वुलर अक्षमता का एक मौलिक उपाय कमी आई दौरे उपभेदों (परिधीय के रूप में अच्छी तरह के रूप में रेडियल) myocardial शक्ति और संरचनात्मक विरूपण की एक मौलिक उपाय एल.वी. क्षेत्रों में asynchrony निहित दिल की आवधिक पंप विशेषताओं के मौलिक उपाय दीवार गति और समरूपता वैक्टर परिमाण और दिशा में परिवर्तन को प्रभावित साइट पर परिमाण दिशा, और समरूपता का प्रदर्शन mitral वाल्व और महाधमनी के आयाम mitral वाल्व छिद्र और महाधमनी के आंतरिक व्यास में परिवर्तन mitral regurgitation रक्त के पीछे एल.वी. से बाएं आलिंद mitral पत्रक की अधूरी बंद के कारण के लिए प्रवाह क्षेत्र वार रेडियल के परिमाण में परिवर्तन (Srad) और परिधीय तनाव (Scir) तनाव की दरों में उनके बदलते पैटर्न में चिह्नित पूर्व आईआर डेटा के सापेक्ष भिन्नता के साथ परिवर्तन एल.वी. क्षेत्रों के synchronicity के रूप में इकोकार्डियोग्राफी की अमेरिकन सोसायटी के अनुसार विभाजित निलय यांत्रिक synchronicity और myocardial कठोरता के साथ सहयोग दौरे शक्ति में कमी के रूप में ऊतक डॉपलर और तनाव इमेजिंग द्वारा मूल्यांकन फिल्में चित्रण IR प्रभावित साइट का समझौता आंदोलन (धीमी और असममित) में दिखाया गया है वैक्टर परिमाण और दिशा में परिवर्तन mitral वाल्व orif के आंतरिक diametersबर्फ और महाधमनी चित्र . 1i दौरे तनाव माप: अंत पाद लंबा पूर्ण विश्राम कम से कम वैक्टर (एम 1) द्वारा दिखाए गए चित्र 1ii दौरे तनाव माप: एल.वी. और वैक्टर की लंबाई और दिशा से करार कर दिखाया है, चोट साइट (हरा बिंदु) संकुचन सीमित है ( M2) चित्र . 1iii दौरे तनाव माप: अंत प्रकुंचन, पूर्ण कम से कम वैक्टर (एम 3) द्वारा दिखाया संकुचन चित्र 1iv दौरे तनाव माप: पाद लंबा पर लंबे अक्ष (एम 4) चित्र 1V दौरे रेडियल (एस रेड) तनाव माप: रंग कोडित घटता संबंधित रंग बिंदुओं पर Fig1.i-IV की छवियों में तनाव (M5) का प्रतिनिधित्व करते हैं. चित्र 1vi दौरे परिधीय (एस cir) तनाव माप: रंग कोडित घटता संबंधित रंग बिंदुओं पर Fig1.i-IV की छवियों में तनाव (M6) का प्रतिनिधित्व करते हैं. चित्रा 1. बी मोड फिल्में (ईडी) के अंत पाद लंबा और अंत प्रकुंचन (ते) और एल.वी. कक्ष आकार के बाद आईआर में परिवर्तन visualizing. बी मोड छवियों के लिए दो आयामी द्वारा बाईं निलय (LV) परिधीय (एस circ) तनाव और रेडियल तनाव (एस रेड) का निर्धारण ट्रैकिंग इकोकार्डियोग्राफी धब्बा . VevoStrain ट्रैकिंग वैक्टर परिमाण और मायोकार्डियम की गति की दिशा axial और parasternal लंबे अक्ष बिगड़ा मायोकार्डियम की चोट साइट पर वैक्टर प्रदर्शन दृश्य चित्रण निरीक्षण एल्गोरिथ्म धब्बा. एक आधारभूत माउस और एक माउस पोस्ट day7 आईआर पर रेडियल और अनुदैर्ध्य उपभेदों. रंग तनाव आधारभूत (पूर्व IR) के मायोकार्डियम पर साइटों में अलग अलग रंग कोडित अंक दिखा प्रोफाइल और कोडित (आईआर के बाद, day7) दिल इलाज. एल.वी. बाएं वेंट्रिकल, आर.वी. सही वेंट्रिकल, एस तनाव रेड – रेडियल, एस तनाव cir – परिधीय. चित्रा 2. Myocardial सेक्टोरल synchronicity. तनाव पूर्व और बाद आईआर डेटा पर आधारित विश्लेषण. एल.वी. इकोकार्डियोग्राफी की अमेरिकन सोसायटी के अनुसार छह क्षेत्रों (1 = पीछे बेसल, 4 = पूर्वकाल बेसल, 2 = पीछे के मध्य, 5 मध्य पूर्वकाल = 3, = पीछे सर्वोच्च, 6 = पूर्वकाल सुप्रीम) में विभाजित है. निलय यांत्रिक myocardial कठोरता के साथ अपने सहयोग को देखने के लिए ऊतक डॉपलर और तनाव इमेजिंग द्वारा मूल्यांकन के रूप में synchrony की मान्यता. रंग कोडित छवि क्षेत्रों में समय के लिए मान के साथ 1-6 से मिलीसेकेंड में इसी क्षेत्रों पर शिखर दिखा पैनल. रेडियल और अनुदैर्ध्य रेखांकन के मामले में पूर्व आईआर और बाद आईआर के लिए प्रदान synchronicities. रेखांकन पर रंग इसी क्षेत्रों के रंग के अनुरूप है. चित्र दिल चूहों में mitral regurgitation के छिद्र व्यास (दोहराया माप के साथ नीले लाइनों), महाधमनी में नमूना मात्रा (पीले लाइनों) (M8): 3i शारीरिक माप चित्र 3ii माउस दिल, ऊपरी आगे और कम mitral वाल्व (M9) में पिछड़े प्रवाह में regurgitant प्रवाह प्रोफाइल चित्र 3iii माउस दिल में प्रवाह वेग प्रोफाइल बाहर महाधमनी (M10) चित्र 3iv mitral वाल्व पर छिद्र regurgitant, ए ओ महाधमनी = ला = बाएं आलिंद, एल.वी. = बाएं वेंट्रिकल, अनुसंधान = त्रिज्या (M11) चित्रा 3. Mitral वाल्व वी regurgitant अंश (आरएफ). Regurgitant अंश की माप के लिए echocardiographic छवि पैनल (आरएफ). महाधमनी (AOD) व्यास और mitral वाल्व छिद्र (MVD) व्यास regurgitant जेट और महाधमनी में नमूना मात्रा के स्थान दिखा मापन. इन मापों regurgitant वेग प्रोफाइल और आरोही महाधमनी प्रवाह में जो ऊपर और नीचे आधारभूत वेग प्रोफाइल के आगे और पीछे रक्त एल.वी. प्रवाह और बाएं आलिंद में वापस संकेत प्रदान करते हैं. आरएफ (%) सूत्र का उपयोग अभिकलन, आरएफ = एमवी सीएसए * पाद लंबा पर एमवी जेट की VTI – ए ओ सीएसए * Ao प्रकुंचन पर जेट की VTI) * 100 / एमवी सीएसए * VTIएमवी की. Regurgitant अंश दिखाने के बाद आईआर चूहों regurgitated mitral वाल्व सूचक regurgitant अंश की मात्रा का ठहराव. Mitral वाल्व प्रभावी regurgitant मुहाना में परिवर्तन (ERO) पोस्ट आईआर एल.वी. की गोलाई के कारण. प्रतिनिधि रंग डॉपलर छवियों बाएं आलिंद से एल.वी. के लिए खून बह चित्रण. बढ़े हुए रक्त प्रवाह छिद्र अशांत प्रवाह और वृद्धि हुई असामान्य प्रवाह वेग को इंगित करता है. ERO वाल्वुलर अक्षमता का संकेत है. प्रवाह वेग aliased. स्पंदित लहर लामिना से अशांत प्रवाह के लिए संक्रमण का निर्धारण करने में लाभ के रूप में उपयोग किया जाता है. ERO गणना सूत्र का उपयोग कर, ERO = फ्लो / Vmax = 2 π r2 / Va Vmax, Va = एलियासिंग वेग, r = छिद्र त्रिज्या, Vmax = अधिकतम गति. चित्र 4ï पूर्व आईआर माउस में कार्यात्मक मापदंडों का माप. सॉफ्ट वेयर अनुरेखण, लाल खड़ी रेखा द्वारा मापदंडों की गणना = पाद लंबा, हरी अनुलंब रेखा प्रकुंचन (M12) चित्र 4ii बाद आईआर माउस में कार्यात्मक मापदंडों का माप. सॉफ्ट वेयर अनुरेखण, लाल खड़ी रेखा द्वारा मापदंडों की गणना = पाद लंबा, हरी अनुलंब रेखा प्रकुंचन (M13) चित्रा 4. वेंट्रिकुलर systolic दबाव (डी पी / dt) के परिवर्तन की दर: पूर्व और बाद IR. इंजेक्शन फ्रैक्शन के डीपी / dt के साथ सहसंबंध (एफई). छवि पैनल एम मोड से जो बुनियादी कार्यात्मक माप लिया जाता है दिखा. समय के साथ दिल सिकुड़ना के भेदभाव, पट्टी रेखांकन दिखा डीपी / dt के बाद IR. एक पैरामीटर के माप का संकेत दूसरे के लिए नैदानिक जानकारी देता है. चित्रा 5. लघु अक्ष पूर्व आईआर तनाव माप प्रदर्शन फिल्म. Echocardiographic फिल्म दिल की parasternal देखने के लिए माउस दिल पूर्व IR में morphology कल्पना से प्राप्त की. चित्रा 6. लघु अक्ष के बाद आईआर एल.वी. तनाव माप फिल्म का प्रदर्शन एक माउस एल.वी. के प्रतिनिधि अक्षीय फिल्म endocardium माना माप में पांच विशिष्ट अंक के साथ ऊतक तनाव वैक्टर प्रदर्शन का पता लगाया. 7 चित्रा. Parasternal रंग लंबे अक्ष डॉपलर फिल्म रंग डॉपलर प्रवाह रक्त प्रदर्शन फिल्म एल.वी. में mitral वाल्व के माध्यम से बाएं आलिंद में पाद लंबा दौरान पंप और रक्त महाधमनी के माध्यम से पंप है प्रवाह नीले रंग दूर और लाल रंग की ओर (BART) की दिशा के साथ दिल के प्रकुंचन चरण के दौरान अल्ट्रासाउंड जांच.