Primaire cellules épithéliales bronchiques humaines Cultivé à partir d'explants

Résumé

Nous décrivons ici une méthode détaillée pour la culture primaire des cellules épithéliales bronchiques humaines à partir d'explants de tissus des voies aériennes bronchiques humaines, y compris la croissance différenciée sur une interface air-liquide. Cette méthode fournit une source abondante de cellules primaires pour enquêter sur le rôle de l'épithélium des voies aériennes dans la santé des poumons et des maladies humaines.

Résumé

Cellules épithéliales bronchiques humaines sont nécessaires pour les modèles cellulaires de la maladie et pour étudier l'effet des excipients et des agents pharmacologiques sur la fonction et la structure des cellules épithéliales humaines. Ici nous décrivons en détail la méthode de culture des cellules épithéliales bronchiques du tissu bronchique qui est récolté par le chirurgien au moment de la chirurgie du poumon (cancer du poumon par exemple ou une chirurgie de réduction du volume pulmonaire). Avec l'approbation de l'éthique et le consentement éclairé, le chirurgien prend ce qui est nécessaire pour la pathologie et nous fournit une partie bronchique qui est éloignée des zones malades. Le tissu est ensuite utilisé comme source d'explants qui peuvent être utilisés pour la culture primaire des cellules épithéliales bronchiques en culture. Segments bronchiques environ 0,5 à 1 cm de long et 1 cm de diamètre ≤ sont rincés à l'EBSS froide et l'excès de tissu parenchymateux est enlevé. Les segments sont à ciel ouvert et hachées dans 2 à 3 mm

Protocole

Homme segments bronchiques constituent une source abondante de cellules épithéliales bronchiques primaires. Dans cet article nous décrivons un protocole pour la croissance et l'expansion de l'Homme épithéliales bronchiques (HBE) à partir de cellules fraîchement isolées humaine segments bronchiques. Ce protocole se compose de cinq sections:

1. Revêtement et gratter plaques de culture 100mm
2. Préparation des explants de tissu bronchique
3. Les greffes de tissus bronchiques
4. Passage des cellules HBE
5. Croissance des cellules ciliées sur les HBE Transwells

Avant de commencer Rem....

Discussion

Dans cette étude, nous avons présenté des méthodes détaillées pour la culture et l'expansion de l'enseignement primaire cellules épithéliales bronchiques humaines. Nous avons démontré comment des explants et des greffes de tissu bronchique, cultivées dans un milieu qui favorise la croissance des cellules épithéliales, peut fournir une source continue de cellules des voies respiratoires épithéliales humaines pour les études de non-différenciées des modèles cellulaires (immergée) et différencié (cultivés sur l'.......

Matériaux

Autres exigences: incubateur, du cabinet de sécurité biologique (BSC), une centrifugeuse, des plaques de culture de 100 mm, tubes stériles (15 ml, 50 ml et 2 ml), embouts de pipette stérile, poignée de scalpel et de lames, de petits ciseaux pointus, des blouses de laboratoire et des gants. Ceux-ci peuvent être obtenus auprès de vos fournisseurs préférés.