Sunumun Amaç, kıkırdak defektleri, MR görüntüleme ile görüntülendi olabilir matris ilişkili kök hücre implantları üretmek için son derece tekrarlanabilir bir yöntem göstermektir. Kök hücreler, agaroz ile karışık FDA onaylı Ferumoxides, kıkırdak hasarlarının içine implante edilerek 7T MR tarayıcı ile görüntülü olarak etiketlenir.
Abstract
Doku mühendisliği alanında özel hücreler ve fonksiyonel doku rejenerasyonu doğru mühendislik, hücre biyolojisi ve tıp ilkelerini bütünleştiren. Matrix ilişkili kök hücre implantlar (Masi) artritik veya travmatik eklem yaralanmaları nedeniyle kıkırdak defektleri yeniden hedefliyoruz. Yetişkin mezenkimal kök hücreler (MKH) chondrogenic soy hücrelerin içine ayırt etme yeteneğine sahip ve hücre tabanlı eklem kıkırdağının onarım teknolojileri için umut verici sonuçlar göstermiştir. Otolog MKH, dokuların çeşitli izole edilebilir farklılaşma potansiyelini kaybetmeden hücre kültürlerinde genişletilebilir, ve in vitro ve in vivo1, 2 chondrogenic farklılaşma göstermiştir.
Kıkırdak hasarlarının yerel tutma ve nakledilen MKH canlılığı sağlamak amacıyla, bir iskele de sonraki farklılaşması ve proliferasyonu destekler ihtiyaç vardır. Iskele kılavuzları doku oluşumu mimarisi ve kök hücreleri tarafından üretilen ekstraselüler matriks, genişletmek için izin verir. Önceki soruşturma% 2 agaroz iskele istikrarlı hyalin kıkırdak gelişimini desteklemek ve bağışıklık yanıtlarını 3 neden olmadığını göstermiştir.
Uzun vadeli tutma Masi nakledilen kök hücrelerin kıkırdak rejenerasyonu için kritik öneme sahiptir. Demir oksit nano ile MKH Etiketleme non-invaziv MR görüntüleme teknikleri 4 de vivo izleme uzun vadeli sağlar.
Bu sunum, demir oksit nano-etiketleme MKH, kıkırdak hasarlarının hücre agaroz yapıları ve bu yapıları implantasyonu nesil tekniklerini gösterecektir. Etiketli yapıları MR görüntüleme ile non-invaziv takip edilebilir.
Protocol
1. Endorem ile hMSCs Etiketleme Hücreler,% 80 izdiham etiketleme en az 18 saat önce büyüdü. Bu süre zarfında 100 ug Fe / ml serum ücretsiz medya bir doz örnek Endorem ekleyerek, etiketleme ortam hazırlanır. Hücreleri izdiham büyüdü sonra, kültür medya aspire edilir ve hücreler PBS veya serum ücretsiz medya ile 1x yıkanır. Daha sonra, durulama çözüm aspire edilir ve önceden hazırlanmış etiketleme medya eklenir. Bu hücreler daha sonra 37 inkübe ° C,% …
Discussion
Açıklanan protokol demir oksit nano ile MKH etiket ve kıkırdak hasarlarının içine bu etiketli MKH implant tekrarlanabilir bir şekilde sağlar. Bu teknik, MR, Masi yetmezliği erken teşhis sağlayan kıkırdak hasarlarının kök hücre nakli non-invaziv bir tasviri izin verir. Etiketli hücreleri efflux çıkığı ya da MR görüntüleri nakli sitesinden etiket yok dayalı teşhis edilebilir. Bu olayların bir erken tanı ve arzu edilen bir durumdur ve hastanın gereksiz alternatif invaziv tanısal işlemler ?…
Acknowledgements
Bu çalışma, Ulusal Artrit Enstitüsü ve Kas-iskelet Deri Hastalıkları, NIH RO1AR054458 bir hibe ile desteklenmiştir.
Materials
Material Name
Type
Company
Catalogue Number
Comment
D-MEM High Glucose
Reagent
Sigma
D5648
PBS (Ca++, Mg++ free)
GIBCO
14190-144
Trypsin-EDTA 0.05%
Invitrogen
25399-120
FBS
Hyclone
SH30071.03
Penicillin/Streptomycin
GIBCO
15140-122
Ferumoxides (Endorem)
Guerbet
Agarose Typ VII
Sigma
A9045
Dilute Agarose in PBS to final concentration of 4%
Nedopil, A. J., Mandrussow, L. G., Daldrup-Link, H. E. Implantation of Ferumoxides Labeled Human Mesenchymal Stem Cells in Cartilage Defects. J. Vis. Exp. (38), e1793, doi:10.3791/1793 (2010).