ヒト臍帯静脈内皮細胞の単離（HUVEC）

Summary

このビデオプロトコルは、ヒト臍帯からヒト臍帯静脈内皮細胞（HUVEC）の単離と文化を示しています。一旦単離さこれらの細胞はまた、ヒューズの研究室で実証最適化されたフィブリンゲルビーズアッセイなどのin vitroでの血管新生アッセイに使用することができます。

Abstract

血管新生は血管新生の刺激に応答して、新しい血管が既存の血管系から作成される複雑なマルチステップのプロセスです。これらの手順は、次のとおりコード、管腔形成、吻合、および新たな基底膜の形成に細胞外マトリックス、ECの整列への内皮細胞の基底膜、増殖と移動（萌芽）（EC）の低下。 in vitroアッセイの多くは、このプロセスを研究するために開発が、ほとんど唯一の血管新生の特定の段階を模倣し、形態学的に血管が多くの場合、in vivoで血管似ていないされています。ここでは、ヒト臍帯静脈ECと線維芽細胞を利用したin vitroでの血管新生アッセイに最適化を示しています。このモデルは、反復する血管新生の重要な初期段階のすべてを、そして重要な血管が偏ECに囲まれた特許細胞間ルーメンを表示します。血管は容易に位相コントラストとタイムラプス顕微鏡で観察し、下流のアプリケーション用に純粋な形で回収することができます。

Protocol

手順過剰な血液オフクリーンパッドとDABにコードを置く。コー​​ドの両端で新鮮なカットを行います。 静脈に、ONプラスチック針のシースで21 1 / 2 Gの針を挿入します 。 （静脈の最大の開口部である、2小さいものが動脈です。） 止血剤で固定針をクランプし、針にハンクスの20ccシリンジを取り付けます。 適度な圧力で静脈を通し…

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
0.1% Collagenase				10ml per cord, warmed to 37°C
Tissue culture flasks				T75, one per cord.
Hanks medium
scissors				sterile
beaker				sterile
50 ml tubes