मानव नाल की नस endothelial कोशिकाओं के अलगाव (HUVEC)

Summary

यह वीडियो प्रोटोकॉल और मानव मानव गर्भनाल से नाल की नस endothelial कोशिकाओं (HUVEC) के अलगाव की संस्कृति को दिखाता है. एक बार अलग इन विट्रो अनुकूलित आतंच जेल मनका भी ह्यूजेस प्रयोगशाला द्वारा प्रदर्शन परख की तरह angiogenesis assays में इन कोशिकाओं के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है.

Abstract

Angiogenesis एक जटिल बहु कदम प्रक्रिया है, जहां angiogenic stimuli करने के लिए प्रतिक्रिया में, नए जहाजों मौजूदा vasculature से बनाया जाता है है. इन चरणों में शामिल हैं: तहखाने झिल्ली प्रसार और प्रवास endothelial कोशिकाओं (अंकुरण) (ईसी) बाह्य मैट्रिक्स, डोरियों, लुमेन गठन, सम्मिलन, और एक नया तहखाने झिल्ली के गठन में चुनाव आयोग के संरेखण में की गिरावट. इन विट्रो assays में कई करने के लिए इस प्रक्रिया का अध्ययन किया गया विकसित किया है, लेकिन अधिकांश केवल angiogenesis के कुछ चरणों की नकल, और आकृति विज्ञान के वाहिकाओं अक्सर vivo में जहाजों समान नहीं है. यहाँ हम का प्रदर्शन इन विट्रो angiogenesis परख है कि मानव नाल की शिरा चुनाव आयोग और fibroblasts इस्तेमाल में अनुकूलित. यह मॉडल angiogenesis की कुंजी प्रारंभिक चरणों के सभी का स्मरण दिलाता है, और महत्वपूर्ण बात वाहिकाओं पेटेंट कहनेवाला polarized चुनाव आयोग द्वारा घिरा lumens प्रदर्शित करते हैं. वेसल्स आसानी से चरण विपरीत और समय चूक माइक्रोस्कोपी द्वारा मनाया जा सकता है, और बहाव के अनुप्रयोगों के लिए शुद्ध रूप में बरामद.

Protocol

प्रक्रिया स्वच्छ और अतिरिक्त रक्त बंद पैड थपका पर कॉर्ड लेटाओ. रस्सी के दोनों सिरों पर ताजा कटौती करें. प्लास्टिक की सुई पर म्यान के साथ नस में 21 1 / 2 जी सुई डालें . (नस सबसे बड़ा खोलने है, 2 छोटे…

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
0.1% Collagenase				10ml per cord, warmed to 37°C
Tissue culture flasks				T75, one per cord.
Hanks medium
scissors				sterile
beaker				sterile
50 ml tubes