Выделение пупочной вены человека эндотелиальных клеток (HUVEC)

Summary

Это видео показывает протокол изоляции и культуры пупочной вены человека эндотелиальных клеток (HUVEC) от человеческой пуповины. После выделения этих клеток могут быть использованы для экстракорпорального ангиогенеза анализы, как оптимизированная фибринового геля из бисера Анализ также свидетельствует лаборатории Hughes.

Abstract

Ангиогенез представляет собой сложный многоступенчатый процесс, где в ответ на ангиогенных стимулы, новые суда создаются из существующих сосудов. Эти шаги включают в себя: деградации базальной мембраны, пролиферации и миграции (прорастание) эндотелиальных клеток (ЕК) в внеклеточного матрикса, выравнивания ЕС в шнуры, просвет образования, анастомоза, и формирование новой базальной мембраны. Многие в пробирке тесты были разработаны для изучения этого процесса, но большинство лишь имитируют определенные этапы ангиогенеза, и морфологически судов часто не похожи на судах в естественных условиях. Здесь мы показываем, оптимизированных в пробирке ангиогенеза анализа, который использует пупочной вены человека ЕС и фибробластов. Эта модель повторяет все ключевые ранней стадии ангиогенеза, и, что важно суда дисплей патент межклеточных люмен окруженной поляризованной ЕС. Суда могут быть легко наблюдать фазового контраста и покадровой микроскопии, а также взысканы в чистом виде для последующих применений.

Protocol

Процедура Положите шнур на чистую площадку и промокните лишнюю кровь. Сделайте свежие порезы на обоих концах кабеля. Вставьте 21 1 / 2 G иглу с иглы пластиковый чехол ON, в вену. (Вены является крупнейшим открытием; 2 небольших них артерий) Зажим иглу в месте …

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
0.1% Collagenase				10ml per cord, warmed to 37°C
Tissue culture flasks				T75, one per cord.
Hanks medium
scissors				sterile
beaker				sterile
50 ml tubes