Ophalen van Muis Eicellen
Summary
Dit protocol laat de techniek voor de extractie van eicellen of een vroeg stadium bevrucht embryo uit de eileider van muizen. De mogelijkheid om de infindibulum identificeren en steek een stomp uiteinde naald in is het essentieel om de juiste uitvoering van de procedure.
Abstract
Tot op heden hebben slechts een paar studies met succes manipulaties van Peromyscus embryogenese of reproductieve biologie. Samen met de Peromyscus Genetische Stock Center (http://stkctr.biol.sc.edu), zijn wij het karakteriseren van de meest opvallende verschillen die nodig is om dit systeem te ontwikkelen. Een primaire doel is geweest om eicel / vroege embryo ophalen optimaliseren.
Protocol
Discussion
In dit artikel tonen we het ophalen van eicellen van ovulatie-geïnduceerde (gesuperovuleerde) Peromyscus. Het gebruik van superovulatie (in tegenstelling tot natuurlijke oestrische cyclus) is vaak te wijten aan de veel grotere aantallen als gevolg. Voorzichtigheid moet echter worden genomen bij het interpreteren van resultaten gebruik te maken van zulke eicellen / embryo's, omdat zowel de hormonen worden gebruikt om de ovulatie en het kweken induceren, kunnen effecten hebben.
Wanneer oestrische is bevestigd, zijn vrouwen euthen…
Acknowledgements
Ik wil Mike bedanken Dewey uit de Peromyscus Genetische Stock Center voor zijn hulp, geduld en kennis.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Flushing needle | Tool | Zephyrtronics | ZT5-130-L | 30 gauge blunt |
| Forceps (2) | Tool | Roboz | RS-5060 | |
| Peromyscus | Animal | Peromyscus Genetic Stock Center | ||
| Scissors | Tool | Roboz | RS-5880 | |
| FHM HEPES Buffered Media | Reagent | Specialty Media | MR-025-d | |
| KSOM Embryo Culture Medium (5×10 ml) | Reagent | Specialty Media | MR-020P-5F | |
| Mouth Pipette | Tool | Pulled from glass capillaries and attached to rubber tubing | ||
| Oocyte holding dish | Tool | Glass container with concave divets |
