Récupération des ovocytes de souris
Summary
Ce protocole illustre la technique d'extraction ou d'ovocytes à un stade précoce des embryons fertilisés de l'oviducte de la souris. La capacité à identifier les infindibulum et insérer une aiguille extrémité émoussée en elle est essentielle à l'exécution correcte de la procédure.
Abstract
À ce jour, seules quelques études ont rapporté des manipulations de succès de l'embryogenèse Peromyscus ou biologie reproductive. En collaboration avec le Centre de Peromyscus stock génétique (http://stkctr.biol.sc.edu), nous caractérisons les différences saillantes nécessaires pour développer ce système. Un premier objectif a été d'optimiser ovocyte / récupération précoce de l'embryon.
Protocol
Discussion
Dans cet article, nous démontrons la récupération d'ovocytes à partir de l'ovulation induite (superovulation) Peromyscus. L'utilisation de superovulation (par opposition à cycle œstral naturel) est commune en raison du nombre beaucoup plus important qui en résulte. Cependant, il faut être prudent dans l'interprétation des résultats en utilisant des ovocytes de telles / embryons, à la fois comme les hormones utilisées pour induire l'ovulation et la culture peuvent avoir des effets.
Lorsque œstral a é…
Acknowledgements
Je tiens à remercier Mike Dewey partir du Centre de stock génétique Peromyscus pour son aide, de patience et de connaissances.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Flushing needle | Tool | Zephyrtronics | ZT5-130-L | 30 gauge blunt |
| Forceps (2) | Tool | Roboz | RS-5060 | |
| Peromyscus | Animal | Peromyscus Genetic Stock Center | ||
| Scissors | Tool | Roboz | RS-5880 | |
| FHM HEPES Buffered Media | Reagent | Specialty Media | MR-025-d | |
| KSOM Embryo Culture Medium (5×10 ml) | Reagent | Specialty Media | MR-020P-5F | |
| Mouth Pipette | Tool | Pulled from glass capillaries and attached to rubber tubing | ||
| Oocyte holding dish | Tool | Glass container with concave divets |
