Summary
Este protocolo ilustra a técnica para extrair óvulos ou embriões em estágio inicial fertilizado do oviduto de camundongos. A capacidade de identificar o infindibulum e inserir uma agulha na extremidade sem corte, é essencial a correta execução do procedimento.
Abstract
Até o momento, poucos estudos têm relatado manipulações sucesso da embriogênese Peromyscus ou biologia reprodutiva. Juntamente com o Peromyscus genética de Stock Center (http://stkctr.biol.sc.edu), estamos caracterizando as diferenças importantes necessários para desenvolver este sistema. A meta principal tem sido a de otimizar oócito / recuperação embrionária precoce.
Protocol
Discussion
Neste artigo, demonstramos a recuperação de ovócitos de ovulação induzida (superovuladas) Peromyscus. O uso de superovulação (em oposição ao ciclo estral natural) é comum, devido ao número muito maior resultante. No entanto, o cuidado deve ser tomado na interpretação dos resultados utilizando oócitos tais / embriões, já que ambos os hormônios usados para induzir a ovulação e cultura podem ter efeitos.
Quando estral foi confirmado, as fêmeas são euthenized e tubas uterinas recuperados, juntamente com uma pe…
Acknowledgements
Gostaria de agradecer a Mike Dewey do Centro de Ações Peromyscus Genéticos para a sua ajuda, paciência e conhecimento.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Flushing needle | Tool | Zephyrtronics | ZT5-130-L | 30 gauge blunt |
| Forceps (2) | Tool | Roboz | RS-5060 | |
| Peromyscus | Animal | Peromyscus Genetic Stock Center | ||
| Scissors | Tool | Roboz | RS-5880 | |
| FHM HEPES Buffered Media | Reagent | Specialty Media | MR-025-d | |
| KSOM Embryo Culture Medium (5×10 ml) | Reagent | Specialty Media | MR-020P-5F | |
| Mouth Pipette | Tool | Pulled from glass capillaries and attached to rubber tubing | ||
| Oocyte holding dish | Tool | Glass container with concave divets |
