ラット間葉系幹細胞（MSC）とMSCを派生シングルコロニーの分離の分離と濃縮
Summary
ラットMSCを、大腿骨と脛骨から分離し、磁気細胞ソーティングで濃縮した。ソートされた細胞はフローサイトメトリーによる表面マーカーの発現について確認した。これらの細胞はまた、単一のコロニーを形成するためにクローン密度で培養した後、これらのコロニーをクローニングシリンダーにより分離した。
Abstract
MSCは、治療用途のための有望な源である成体幹細胞の集団である。これらの細胞は、骨髄から単離することができると簡単に、プラスチック接着による造血幹細胞（HSC）から分離することができる。このプロトコルは、ラットの大腿骨と脛骨からMSCを分離する方法について説明します。分離した細胞をさらに磁気細胞選別して、2つのMSCの表面マーカーCD54とCD90に対する濃縮した。表面マーカーCD54とCD90の発現は、フローサイトメトリー分析によって確認した。 HSCマーカーCD45はまた、ソートされたMSCのが造血幹細胞が枯渇していたかどうかを確認するために含まれていた。 MSCは、自然にかなり異質です。さまざまな形状、増殖および分化能力を有する細胞の亜集団がある。これらの亜集団は、すべての既知のMSCのマーカーを発現していないユニークなマーカーはまだ異なる部分母集団に同定されていない。したがって、別の亜集団を分離するための代替アプローチは、単一コロニー由来の細胞を分離するためにクローニングシリンダーを使用しています。シングルコロニーに由来する細胞を培養すると別々に評価することができます。
Protocol
Discussion
このプロトコルは、分離してMSCを豊かにする方法について説明します。シングルコロニー由来の細胞を分離する方法も組み込まれています。成功した分離、濃縮とコロニー分離する際に重要となるいくつかのステップがあります。ラットからの細胞単離を行っている間、それは、セルストレーナーまたは血液凝固と骨の破片を取り除くために同じようなサイズの滅菌ナイロンメッシュを介し?…
Acknowledgements
作品は、国立衛生研究所（R01GM079688、R21RR024439、およびR21GM075838）、国立科学財団（CBET 0941055）、およびMSU財団によって部分的にサポートされていました。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 1X D-PBS | Invitrogen | 14040-133 | ||
| DMEM | Invitrogen | 11885-084 | ||
| Cell strainer | BD Bioscience | 352350 | ||
| FBS | Invitrogen | 26140-079 | ||
| Pen-Strep | Invitrogen | 15140 | ||
| Trypsin-EDTA | Invitrogen | 25200-056 | ||
| BD Imagnet | BD Bioscience | 552311 | ||
| Biotin mouse IgG2a | BD Bioscience | 555572 | ||
| Biotin mouse IgG1 | BD Bioscience | 555747 | ||
| Biotin anti-rat CD54 | Cedarlane Labs | CL054B | ||
| Biotin anti-rat CD90 | Cedarlane Labs | CL005B | ||
| Biotin anti-rat CD45 | Cedarlane Labs | CL001B | ||
| BD Imag buffer | BD Bioscience | 552362 | ||
| Round-bottom tube | BD Bioscience | 352063 | ||
| Streptavidin particles | BD Bioscience | 557812 | ||
| SA-PE | R&D systems | F0040 | ||
| Cloning cylinder | Sigma | C2059 |
References
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