Ein Modell des Disturbed Flow-Atherosklerose in Maus Halsschlagader durch partielle Ligation und eine einfache Methode zur RNA-Isolierung aus Carotid Endothelium
Summary
Dies beschreibt eine partielle carotis Ligation Chirurgie, die gestörte Strömungsverhältnisse und die anschließende Atherosklerose-Entwicklung (in zwei Wochen) führt mit intraplaque neo-Vaskularisation (in vier Wochen) in der Maus Arteria carotis communis. Wir beschreiben eine neuartige Methode der RNA-Isolierung aus der Intima, das hohe Reinheit endothelial RNA.
Abstract
Trotz der bekannten engen Verbindung, hat einen direkten Beweis, der gestörten zur Atherogenese gefehlt. Vor kurzem haben wir eine modifizierte Version der Carotis partielle Ligation verwendeten Methoden [1,2] zeigen, dass es akut induziert niedrig und oszillatorische Strömungsverhältnisse, zwei wichtige Eigenschaften des gestörten, in der Maus Arteria carotis communis. Mit diesem Modell haben wir direkten Beweis dafür, dass gestörten Tat führt zu einer schnellen und robusten Atherosklerose Entwicklung in Apolipoprotein E-Knockout-Maus [3] zur Verfügung gestellt. Wir haben auch eine Methode entwickelt, von Endothel-RNA-Präparation mit hoher Reinheit aus dem Maus-Intima [3]. Mit dieser Maus-Modell und Methode fanden wir, dass partielle Ligation Ursachen endotheliale Dysfunktion in einer Woche, gefolgt von robusten und schnellen Atherombildung in zwei Wochen in einem hyperlipämischen Mausmodell mit Features von komplexen Läsionen Bildung wie intraplaque Neovaskularisation von vier Wochen. Diese schnelle<em> In vivo</em> Modell und die Endothel-RNA Präparationsmethode verwendet werden, um molekulare Mechanismen zugrunde liegenden Fluss-abhängige Regulation der vaskulären Biologie und Krankheiten zu bestimmen. Auch könnte es verwendet, um verschiedene therapeutische Interventionen gezielt endotheliale Dysfunktion und Atherosklerose in erheblich reduziert Studiendauer zu testen.
Protocol
Discussion
In diesem Verfahren wird eine ordnungsgemäße Identifizierung aller Zweige der A. carotis einschließlich der A. carotis externa, A. carotis interna, A. occipitalis und A. thyreoidea superior unerlässlich. Es ist auch wichtig, um das Strömungsbild mit Hilfe von Ultraschall als bewiesen zu überprüfen. In unserem erfahrenen Händen ist unser Erfolg von Teil-Ligation Operationen auf dem Ultraschall-Untersuchungen von mehr als 500 Mäusen besser als 90%. Für die Karotis-Intima-RNA-Präparationen, ist es wichtig, die A…
Acknowledgements
Diese Arbeit wurde durch Mittel aus NIH gewährt HL87012 (HJ), HL75209 (HJ), UO1HL80711 (DH, DG, HJ) und ein Weltklasse-Universität Project (HJ) vom Ministerium für Wissenschaft, Technologie und Bildung von S. Korea unterstützt.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Normal Saline (0.9% sodium chloride) | Baxter | 2B1323 | ||
| Insulin syringe (3/10 ml 29g syringe) | Tyco Health care | 8881600145 | ||
| HBSS | Cellgro, Mediatech, Inc. | 21-023 | ||
| miRNeasy mini kit (including, QIAzol) | QIAGEN | 217004 | ||
| Vevo 770 High-Resolution Micro-Imaging System | Visualsonics | a.Visualsonics 770 system b.Imaging stage c.Vevo integrated rail system d.RMV scan head for mice |
or similar system | |
| 6-0 Silk Suture, sterile | Covidien | s-1172 c2 | ||
| Small scissors | Roboz | RS-5675 | or similar | |
| Dissecting Forceps | Roboz | RS-5005 | or similar | |
| Tissue Mend II | Webster Vet Supply | 07-856-7946 |
References
- Korshunov, V. A., Berk, B. C. Flow-induced vascular remodeling in the mouse: a model for carotid intima-media thickening. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 23 (12), 2185-2191 (2003).
- Sullivan, C. J., Hoying, J. B. Flow-dependent remodeling in the carotid artery of fibroblast growth factor-2 knockout mice. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 22 (7), 1100-1105 (2002).
- Nam, D. Partial carotid ligation is a model of acutely induced disturbed flow, leading to rapid endothelial dysfunction and atherosclerosis. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 297 (4), H1535-H1543 (2009).
