Un modèle de Disturbed flux athérosclérose induite chez la souris artère carotide par ligature partielle et une méthode simple d'isolement d'ARN de l'endothélium carotidienne

Résumé

Ceci décrit une ligature partielle carotide, ce qui provoque des conditions d'écoulement perturbé et développement de l'athérosclérose ultérieure (dans deux semaines) avec intraplaque néo-vascularisation (en quatre semaines) chez la souris l'artère carotide commune. Nous décrivons également une nouvelle méthode d'isolement d'ARN à partir de l'intima carotidienne, fournissant ARN haute pureté endothéliales.

Résumé

Malgré l'association connue près, les preuves directes reliant écoulement perturbé à l'athérogenèse a fait défaut. Nous avons récemment utilisé une version modifiée de la carotide méthodes ligature partielle [1,2] pour montrer qu'il induit gravement les conditions de faible débit et oscillatoire, deux caractéristiques essentielles du flux perturbé, chez la souris l'artère carotide commune. En utilisant ce modèle, nous avons fourni des preuves directes qui en découlent perturbée conduit en effet au développement rapide et robuste athérosclérose chez la souris knockout apolipoprotéine E [3]. Nous avons également développé une méthode de préparation de l'ARN endothéliales avec une grande pureté de l'intima carotidienne la souris [3]. L'utilisation de ce modèle de souris et de la méthode, nous avons constaté que la ligature partielle entraîne une dysfonction endothéliale en une semaine, suivie de la formation d'athérome robuste et rapide de deux semaines dans un modèle de souris hyperlipidémiques ainsi que des fonctions de formation de lésions complexes tels que la néovascularisation intraplaque de quatre semaines. Ce rapide

Protocole

1. Ligature partielle de l'artère carotide gauche

1. Les souris sont utilisées à ~ 8 semaines d'âge. Le poids de la souris est recommandé d'avoir au moins 18 grammes.
2. Stériliser les instruments pour les 30 secondes dans le stérilisateur à l'instrument de perles et laisser refroidir
3. Induire une anesthésie à la kétamine (80mg/kg) et de xylazine (10mg/kg) anesthésie intrapéritonéale (ip) par injection ou alternative approuvée par IACUC. Pour une injection ip, injecter de la souris dans le quadrant en bas à gauche de l'abdomen.
4. Placez la souris dans une chambre de réchauffement jusqu'à ce que complètement anesthésiés. Vérifiez la pro....

Discussion

Dans cette procédure, l'identification correcte de toutes les branches de la carotide commune, y compris la carotide externe, la carotide interne, artère occipitale et l'artère thyroïdienne supérieure est essentielle. Il est également important de vérifier la configuration de l'écoulement en utilisant des ultrasons comme l'a démontré. Dans nos mains expérimentés, notre taux de succès des chirurgies ligature partielle sur la base des études de l'échographie de plus de 500 souris est supérieure à 90%. .......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Sérum physiologique (chlorure de sodium à 0,9 %)	Baxter Internationl Inc.	2B1323
Seringue à insuline (seringue de 3/10 ml, 29g)	Tyco Healthcare, Covidien	8881600145
HBSS	Cellgro	21-023
Kit miRNeasy mini (incluant QIAzol)	Qiagen	217004
Système d'imagerie microscopique haute résolution Vevo 770	VisualSonics, inc.	a. Système Visualsonics 770 b. Plateau d'imagerie c. Système de rail intégré Vevo d. Tête de balayage RMV pour souris	ou système similaire
Fil de soie 6-0, stérile	Covidien	s-1172 c2
Petites ciseaux	Roboz Surgical Instruments Co.	RS-5675	ou équivalent
Pinces anatomiques	Roboz Surgical Instruments Co.	RS-5005	ou équivalent
Tissue Mend II	Webster Veterinary	07-856-7946