الخطية من الفحص البروتين برادفورد
Summary
هو خطر على دقة وحساسية من بروتين تقرير الفحص برادفورد سريعة ومريحة من خلال استقامة الذاتية. نظهر الخطية إجراء بسيط هو أن يزيد كثيرا من الدقة ، ويحسن من حساسية مقايسة حول أضعاف – 10 ، ويخفف كثيرا تدخل المنظفات.
Abstract
ويتم إنجاز تقرير كميات من البروتين ميكروغرام في مقايسة Coomassie برادفورد الزرقاء الرائعة التي كتبها قياس الامتصاصية في 590 نانومتر. هذا الاختبار الأكثر شيوعا وبسيطة تمكن السريع الكمي البروتين في الخلية lysates ، الكسور الخلوية ، أو عينات البروتين المؤتلف ، لغرض التطبيع القياسات البيوكيميائية. ومع ذلك ، واستقامة تنازلات جوهرية لحساسية ودقة هذه الطريقة. وتبين أنه في ظل ظروف الفحص القياسية ، فإن نسبة من قياسات الامتصاصية في 590 نانومتر و 450 نانومتر خطي صارم مع تركيز البروتين. هذا الإجراء البسيط يزيد من دقة ويحسن من حساسية مقايسة حول الكمي ، 10 أضعاف السماح باستمرار إلى 50 نانوغرام من ألبومين المصل البقري. علاوة على ذلك ، تقلص إلى حد كبير التدخل قدم عادة بواسطة المنظفات المستخدمة لإنشاء خلية lysates البروتوكول الجديد. معادلة خطية وضعت على أساس العمل الجماعي وقانون بير يناسب تماما على البيانات التجريبية.
Protocol
Discussion
وفحص البروتين برادفورد تحظى بشعبية نظرا لسهولة الأداء والحساسية النسبية. عرضت الخطية على تركيزات بروتين كامل مجموعة التي حصلت عليها بروتوكول هنا يبسط كذلك مقايسة ، والعينات غير معروفة لا تحتاج إلى تدخل ضمن نطاق الرسم البياني المعايرة.
<p class="jove_content" style=";text-align:right;di…Acknowledgements
وتكرس هذه الورقة لذكرى الراحل Selinger الدكتور تسفي ، الذي استضاف البحوث الأصلية وصفها هنا.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Bradford reagent | Bio-Rad Laboratories | 500-0006 | ||
| Bovine Serum Albumin | Amersco | 0332 | ||
| Multiplate absorbance reader | BioTek | Synergy2 |
References
- Bradford, M. M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Anal Biochem. 72, 248-254 (1976).
- Chial, H. J., Thompson, H. B., Splittgerber, A. G. A spectral study of the charge forms of Coomassie blue G. Anal Biochem. 209, 258-266 (1993).
- Chial, H. J., Splittgerber, A. G. A comparison of the binding of Coomassie brilliant blue to proteins at low and neutral pH. Anal Biochem. 213, 362-369 (1993).
- Compton, S. J., Jones, C. G. Mechanism of dye response and interference in the Bradford protein assay. Anal Biochem. 151, 369-374 (1985).
- Congdon, R. W., Muth, G. W., Splittgerber, A. G. The binding interaction of Coomassie blue with proteins. Anal Biochem. 213, 407-413 (1993).
- Zor, T., Selinger, Z. Linearization of the Bradford protein assay increases its sensitivity: theoretical and experimental studies. Anal Biochem. 236, 302-308 (1996).
