Medaka et le poisson-zèbre sont complémentaires pour la dissection génétique du génome des vertébrés fonctions. Ce protocole met en évidence les points clés pour réussir la microinjection dans des embryons de medaka, une technique importante pour l'analyse embryologique et génétique à l'aide medaka et le poisson zèbre dans un laboratoire.
Dans cette vidéo, nous démontrons la technique de micro-injection dans une cellule embryons médaka scène. Medaka est un poisson d'eau douce petite ponte qui permet des analyses génétiques et embryologiques et est l'un des organismes modèles vertébrés dans lequel l'ensemble du génome phénotype mutant axée écrans ont été effectuées 1, comme dans le poisson zèbre et la souris. Divergence de chevauchement fonctionnelle des gènes liés entre medaka et le poisson-zèbre permet l'identification de phénotypes nouveaux qui ne sont pas identifiables dans une seule espèce 2, ainsi medaka et le poisson-zèbre sont complémentaires pour la dissection génétique du génome des vertébrés fonctions.
Pour profiter de poissons médaka dont les embryons sont transparents et développer à l'extérieur, la microinjection est une technique essentielle pour injecter des cellules-traceurs pour les cellules de l'étiquetage, les ARNm ou oligonucléotides anti-sens pour les sur-exprimant et frapper vers le bas des gènes d'intérêt, et d'ADN pour faire lignées transgéniques.
Dans cette vidéo, nous démontrons une méthode pour traceur cellulaire, de l'ARNm, l'ADN ou anti-sens d'injection d'oligonucléotides en une seule cellule embryons médaka scène. Cette technique nous a permis d'étudier divers processus de développement in vivo en temps réel. Ce processus et l'analyse subséquente détaillées qu'il offre a le potentiel d'améliorer considérablement notre compréhension de l'organogenèse des vertébrés et de la biologie cellulaire sous-jacent. Ces connaissances peuvent être importants pour, et le rendement des applications thérapeutiques en médecine régénérative.
Ce travail a été soutenu par une subvention de la MRC.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
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4″ fine net | Tools | J & K Aquatics Ltd. | MD001 | Used to capture fish during egg harvesting. |
Embryo medium | Reagent | Made in-house | 200ml 50X stock solution, 1ml 1%methyleneblue in H2O/10 liter RO water (50X stock solution: NaCl 14.7g, KCl 0.6g, CaCl2 2H2O 2.4g, MgSO4 7H2O 4.0g/1 litre RO water. | |
Fine waterproof sandpaper – p2000 grit size | Tools | Hermes Abrasives Ltd. | Very fine grit size for rolling/cleaning embryos with chorions. | |
Borosilicate glass capillaries | Tool | Harvard Apparatus | GC100-10F | For making microinjection needles. |
Micropipette puller | Equipment | Narishige scientific instrument lab | Model PP-830 | For making microinjection needles. |
Eppendorf microloader | Tool | Eppendorf | 5242956.003 | For loading microinjection needles. |
Microinjector apparatus | Equipment | Eppendorf | Model 5242. | |
Micromanipulator | Equipment | Narishige | Model MN151. | |
Agarose injection plate | Tools | Made in-house | For holding embryos during injection. |