Экспериментальные Пробирной метастазы
Summary
В этой статье описываются процедуры анализа экспериментальных метастазов, который используется для определения метастатического потенциала человеческих клеточных линий рака.
Abstract
Метастазы являются основной причиной смерти у онкологических больных. Чтобы понять механизм метастазирования, экспериментальные анализа метастазы был установлен с использованием иммунодефицитных мышей. Данная статья описывает процедуры, связанные в этом анализе, в том числе подготовка проб, внутривенные инъекции, и культивирования клеток от метастазов в легких. Короче говоря, заранее оговоренное число раковых клеток человека были подготовлены<em> В пробирке</em> И непосредственно вводится в обращение иммунодефицитных мышей в их жилах хвост. Небольшое число клеток выживать турбулентности в обращении и расти, как метастазы во внутренних органах, таких как рак легких. Вводили мышам расчленены по истечении определенного периода. Распределение в тканях метастазов определяется по рассекает микроскопом. Количество метастазов в конкретной ткани считается и прямо коррелирует с метастатическим способность вводили раковые клетки. Возникли метастазы изолированных и культурной<em> В пробирке</em> Как клеточных линий, которые часто показывают расширение метастатическим способностями, чем родительские линии, когда вводили опять в иммунодефицитных мышей. Эти высоко метастатической производных стать полезным инструментом для выявления генов или молекулярных путей, которые регулируют метастатической прогрессии.
Protocol
Discussion
Метастазы являются основной причиной смерти у онкологических больных. Она включает в себя четыре основных этапа: отряд раковые клетки от их основных локусов, их вступление в обращении (intravasation), их выезда из кровообращения (кровоизлияние), а выживание и рост в далеком органа. Метастазы в…
Acknowledgements
Этот протокол был протестирован и оптимизирован первоначально в лаборатории д-р Ричард Хайнс (MIT). Финансирование предоставляется AWARD NYSTEM IDEA (для LX) и Рут Л. Kirschstein Национальный исследовательский Service Award (для LX).
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| DMEM | Invitrogen | 10313-021 | ||
| FBS | Hyclone | SH30088.03 | ||
| HBSS | Invitrogen | 14175-095 | ||
| NaCl | Sigma-Aldrich | S9888 | ||
| KCl | Mallinckrodt Chemicals | 6838-04 | ||
| Na2 HPO4.7H2O | Mallinckrodt Chemicals | 7896-04 | ||
| KH2PO4 | Mallinckrodt Chemicals | 7100-12 | ||
| Phenol red | Sigma-Aldrich | P3532 | ||
| EDTA-Na | EMD Biosciences | 4010 | ||
| Trypan Blue | Invitrogen | 15250-061 | ||
| Trypsin 2.5% | Invitrogen | 15090-046 | ||
| Ethanol | Ultrapure | 200-CSGP | ||
| 50 ml Falcon Tube | VWR | 89039-656 | ||
| Microcentrifuge Tubes | Axygen Scientific | MCT-175-C | ||
| Falcon 70µm Cell Strainer | BD Biosciences | 352350 | ||
| 5ml Falcon Culture Tube | VWR | 60818-576 | ||
| Hemacytometer | Hausser Scientific | 15170-208 | ||
| 1 ml syringe | BD Biosciences | 329650 | ||
| 30 ½ gauge needle | BD Biosciences | 305106 | ||
| Mouse restrainer | Plas Labs Inc. | 551-BSRR | ||
| Surgical scissors | Fisher Scientific | 08-940 | ||
| Forceps | Fisher Scientific | 08-902 | ||
| Dissecting Microscope | Nikon | SMZ1500 | ||
| Benchtop Centrifuge | Thermoscientific | 75003491 |
References
- Xu, L. Gene expression changes in an animal melanoma model correlate with aggressiveness of human melanoma metastases. Mol Cancer Res. 6 (5), 760-760 (2008).
- Clark, E. A., Golub, T. R., Lander, E. S., Hynes, R. O. Genomic analysis of metastasis reveals an essential role for RhoC. Nature. 406 (6795), 532-532 (2000).
- Xu, L., Begum, S., Hearn, J. D., Hynes, R. O. GPR56, an atypical G protein-coupled receptor, binds tissue transglutaminase, TG2, and inhibits melanoma tumor growth and metastasis. Proc Natl Acad Sci U S A. 103 (24), 9023-9023 (2006).
- Kozlowski, J. M., Hart, I. R., Fidler, I. J., Hanna, N. A human melanoma line heterogeneous with respect to metastatic capacity in athymic nude mice. J Natl Cancer Inst. 72 (4), 913-913 (1984).
- Kang, Y. A multigenic program mediating breast cancer metastasis to bone. Cancer Cell. 3 (6), 537-537 (2003).
