Assay Métastases expérimentales

Summary

Cet article décrit les procédures d'un essai de métastases expérimentales qui est utilisé pour déterminer le potentiel métastatique de lignées cellulaires humaines de cancer.

Abstract

Les métastases sont la principale cause de décès chez les patients atteints de cancer. Pour comprendre le mécanisme de métastases, un essai de métastases expérimentales a été établi en utilisant des souris immunodéficientes. Cet article définit les procédures impliquées dans cet essai, y compris la préparation des échantillons, l'injection intraveineuse, et la culture de cellules de métastases pulmonaires. Brièvement, un nombre prédéterminé de cellules cancéreuses humaines ont été préparés<em> In vitro</em> Et directement injectées dans la circulation des souris immunodéficientes dans leurs veines de la queue. Un petit nombre de cellules à survivre aux turbulences dans la circulation et de grandir comme des métastases dans les organes internes, comme les poumons. Les souris injectées sont disséqués après une certaine période. La distribution tissulaire des métastases est déterminé sous un microscope à dissection. Le nombre de métastases dans un tissu spécifique est compté et il est directement corrélée avec la capacité métastatique des cellules cancéreuses injectées. Les métastases sont apparues isolées et cultivées<em> In vitro</em> Que les lignées cellulaires, qui présentent souvent des capacités accrues métastatique à la lignée parentale lorsqu'il est injecté à nouveau dans des souris immunodéficientes. Ces dérivés hautement métastatiques deviennent des outils utiles pour identifier les gènes ou les voies moléculaires qui régulent la progression métastatique.

Protocol

1. Préparation des échantillons Cultiver des cellules confluentes à ~ 70% dans leurs médias spécifiques avec des facteurs de croissance ou de FBS (par exemple, DMEM avec du FBS à 10% pour le MC-1 cellules). Aspirer des médias de la plaque et laver délicatement à plusieurs reprises avec 1 x PBS (8 g / L de NaCl, 0,2 g / L de KCl, 1,15 g / L de Na 2 HPO 4 .7 H 2 O, 0,2 g / L de KH 2 PO 4, pH 7,3). Aspirer PBS et ajouter 2 mL de trypsine ?…

Discussion

Les métastases sont la principale cause de décès chez les patients atteints de cancer. Elle comporte quatre grandes étapes: le détachement des cellules cancéreuses de leurs loci primaire, leur mise en circulation (intravasation), leur sortie de la circulation (extravasation), et la survie et la croissance dans un organe à distance. Métastase dans l'homme est considéré comme un processus lent et qui se manifeste souvent après des années de latence. Pour étudier sa progression en temps opportun, le test c…

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
DMEM		Invitrogen	10313-021
FBS		Hyclone	SH30088.03
HBSS		Invitrogen	14175-095
NaCl		Sigma-Aldrich	S9888
KCl		Mallinckrodt Chemicals	6838-04
Na2 HPO4.7H2O		Mallinckrodt Chemicals	7896-04
KH2PO4		Mallinckrodt Chemicals	7100-12
Phenol red		Sigma-Aldrich	P3532
EDTA-Na		EMD Biosciences	4010
Trypan Blue		Invitrogen	15250-061
Trypsin 2.5%		Invitrogen	15090-046
Ethanol		Ultrapure	200-CSGP
50 ml Falcon Tube		VWR	89039-656
Microcentrifuge Tubes		Axygen Scientific	MCT-175-C
Falcon 70µm Cell Strainer		BD Biosciences	352350
5ml Falcon Culture Tube		VWR	60818-576
Hemacytometer		Hausser Scientific	15170-208
1 ml syringe		BD Biosciences	329650
30 ½ gauge needle		BD Biosciences	305106
Mouse restrainer		Plas Labs Inc.	551-BSRR
Surgical scissors		Fisher Scientific	08-940
Forceps		Fisher Scientific	08-902
Dissecting Microscope		Nikon	SMZ1500
Benchtop Centrifuge		Thermoscientific	75003491