Telomere G - 오버행 구조의 시험 Trypanosoma brucei</em
Summary
Telomeres는 염색체의 안정성을 위해 필수이며 telomere G – 오버행 구조는 telomerase – 중재 telomere의 유지 보수를 위해 필수적입니다. 우리는 최근 telomere G – 오버행 구조의 검출을위한 두 가지 방법을 채택했습니다<em> Trypanosoma brucei</em> 이는 인 겔 하이브 리다이 제이션 및 설명됩니다 내고 – 중재 뇌관 확장, 기본 있습니다.
Abstract
telomere G – 오버행 구조는 효모, 척추 동물, 그리고 Trypanosoma brucei 등 많은 eukaryotes에서 발견되었습니다. 그것은 드 노보 telomere DNA 합성에 대한 telomerase를위한 기판 역할 및 telomere 유지 보수에 대한 것이 중요합니다. T는 brucei은 가축의 인간과 nagana에 수면병 일으키는 protozoan 기생충이다. 일단 감염된 포유류의 호스트, T. brucei 세포 정기적으로 숙주의 면역 공격을 회피하기 위해 표면 항원을 전환됩니다. 우리는 최근에 보여준 그 T. brucei telomere 구조 T.에 대한 중요 표면 항원 유전자 발현의 조절에 중요한 역할을 brucei의 pathogenesis. 그러나, T. brucei telomere 구조는 광범위이 전문 구조 분석 방법의 한계로 인해 연구되지 않았습니다. 우리는 이제 성공적으로 하이브리드화 및 telomere G – 오버행 구조의 심사 T.의 뉴클레오 티드 telomere 터미널의 결정을위한 어댑터 내고 방법에 대한 결합 – 중재 뇌관 확장 방법 – 겔의 기본을 채택했습니다 brucei 세포. 여기서는 자세하게 프로토콜을 설명하고 그들의 다양한 장점과 한계를 비교합니다.
Protocol
Discussion
Trypanosoma brucei은 인간의 질병을 자고됩니다. 이 질병은 치료 왼쪽면, 필연적으로 치명적이다. T는 포유류의 호스트에서 brucei 전지는 정기적으로 너무 호스트의 면역 공격 7 피하기 위해 같은 antigenic 변화을 받고있다. 따라서 그것은 T.을 제거하는 것은 매우 어렵습니다 감염되면 brucei 세포가 설정됩니다. 우리는 최근 telomeres가 T.의 표현 규제에 중요…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
우리는 과학적인 토론과 통찰력 제안에 대한 박사 캐롤린 가격 감사드립니다. 이 작품은 NIH 부여 AI066095 (비보 리튬 PI)에 의해 지원됩니다.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| SeaKem LE Agarose | Lonza | 50004 | ||
| Agarose Type VII (low melting agarose) | Sigma | A4018 | ||
| Proteinase K, recombinant, PCR grade | Roche Diagnostic | 03 115801001 | ||
| Exo I | NEB | M0293 | ||
| Exo T | NEB | M0265 | ||
| T7 exonuclease | NEB | M0263 | ||
| T4 DNA polymerase | NEB | M0203 | ||
| QIAquick nucleotide removal kit | Qiagen | 28304 |
References
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