ניתוח של ביטוי גנים בורר אש אמרלד ( Agrilus planipennis) באמצעות Real Time-PCR כמותי
Summary
כמותי בזמן אמת PCR (qRT-PCR) היא כלי יעיל לאבחון רמות ה-mRNA ברקמות חרקים שונים, שלבי התפתחות. בדוח זה אנו מציגים את השימוש qRT-PCR כדי לברר רמות ה-mRNA ברקמות הזחל שונים שלבי ההתפתחות של מינים פולשניים חרקים, דקור ברקת אפר.
Abstract
אמרלד אפר דקור (EAB,<em> Agrilus planipennis</em>) הוא הדברה אקזוטיים פולשניים, אשר גרם למותם של מיליוני עצים אפר (<em> Fraxinus</em> Spp) בצפון אמריקה.<strong></strong> EAB ממשיכה להתפשט במהירות והתקפות אפר עצים בגילאים שונים, מ שתילים עצים בוגרים. עם זאת, עד כה מעט מאוד או לא ידע מולקולרית קיימת EAB. אנחנו מעוניינים לפענח את מולקולרית מבוססי תהליכים פיזיולוגיים ברמת הרקמה סיוע EAB ב קולוניזציה מוצלחת של עצי מילה. בדוח זה אנו מציגים את השימוש האפקטיבי כמותי בזמן אמת PCR (qRT-PCR) כדי לברר רמות ה-mRNA ברקמות הזחל שונים (כולל midgut, גופים שומן לציפורן) ואת שלבי ההתפתחות השונים (כולל 1<sup> רחוב</sup> -, 2<sup> Nd</sup> – 3<sup> Rd</sup> -, 4<sup> ה</sup>-Instars, prepupae ומבוגרים) של EAB. כדוגמה, גן peritrophin (בשם בזאת,<em> AP-PERI1</em>) מודגמת כמו הגן של עניין חלבון ריבוזומלי (<em> AP-RP1</em>) כמו הבקרה הפנימית. Peritrophins הם מרכיבים חשובים של קרום מטריצה peritrophic / (PM), המהווה את רירית המעי חרקים. PM יש פונקציות מגוונות כולל העיכול הגנה מכנית האפיתל midgut.
Protocol
Discussion
מחזורי הסף (CT) מתקבל ערך למדגם כל צלחת qRT-PCR. להכנת עקומת תקן, ערך ה-CT שהתקבלו עבור כל אחד מהם היה דילול זממו נגד ביומן של ריכוז שלה. ערכי ה-CT של דגימות הניסוי היו זממו אז על זה עקומת סדרה דילול סטנדרטי. כמויות יעד חושבו מתוך עקומות תקן נפרד שנוצר עבור כל ניסוי כלומר רקמות ו…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
אנו מכירים את העזרה המסופק על ידי דלתא לורדס Arrueta Antequera (המחלקה לאנטומולוגיה, אוהיו סטייט / OARDC, ווסטר, OH) של ההתקנה של הניסויים. אנו מודים ד"ר תרז פולין (USDA, שירותי יער, NRS) עבור לשלוח דגימות EAB הזחל. עזרה מסופק על ידי ד"ר לואיס סימון קאניאס ו נוריס M אקוסטה עם ההתקנה מיקרוסקופ מוערכת. המימון לפרויקט זה סופק על ידי קרנות המדינה הפדרלי השתלט על החקלאי אוהיו מרכז מחקר ופיתוח, אוניברסיטת מדינת אוהיו.
References
- Lehane, M. J. Peritrophic matrix structure and function. Annu Rev Entomol. 42, 525-550 (1997).
- Mittapalli, O., Sardesai, N., Shukle, R. H. cDNA cloning and transcriptional expression of a peritrophin-like gene in the Hessian fly, Mayetiola destructor [Say]. Arc of Insect Bio. 64, 19-29 (2007).
- Pauchet, Y., Wilkinson, P., van Munster, M., Augustin, S., Pauron, D., ffrench-Constant, R. H. Pyrosequencing of the midgut transcriptome of the poplar leaf beetle Chrysomela tremulae reveals new gene families in Coleoptera. Ins Bio and Mol. 39, 403-413 (2009).
- Pfaffl, W. M. A new mathematical model for relative quantification in real-time RT-PCR. Nucleic Acids Res. 29, 2002-2007 (2001).
- Tellam, R. L., Lehane, M. J., Billingsley, P. F. . Biology of the Insect Midgut. , 86-114 (1996).
