Flash Invriezen en Cryosectioning E12.5 hersenen van muizen
Summary
Aangetoond in deze video zijn de technieken voor flash invriezen en snijden embryonale hersenweefsel van de muis. Nuttige tips voor het gebruik van de cryostaat worden gegeven, waaronder het oplossen van problemen methoden die gebruikt kunnen worden tijdens het snijden om ervoor te zorgen dat de resulterende weefsel secties zijn vrij van scheuren en andere vervormingen.
Protocol
Fix weefsel in 4% paraformaldehyde in PBS voor de gewenste tijd. Sucrose trekken weefsel (cryoprotection) Maak 30% sucrose-oplossing in PBS w / v in 2059 buis. Spoel weefsel 3x in PBS (~ 5 min met schommelen). Plaats weefsel in 30% sucrose oplossing. Weefsel zal niet zinken. Plaats het weefsel in 4 ° C 's nachts, of totdat het is gezonken. Label juiste grootte cryomold met informatie en oriëntatie. Vul cryomold met oktober (vermijd luchtbellen). <…
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Tissue-Tek Cryomold | Ted Pella, Inc. | 27181 | ||
| O.C.T. | Ted Pella, Inc | 27050 | ||
| Sucrose solution | 30% sucrose solution in PBS w/v | |||
| paraformaldehyde | 4% paraformaldehyde in PBS |
Citer Cet Article
Currle, D. S., Monuki, E. S. Flash Freezing and Cryosectioning E12.5 Mouse Brain. J. Vis. Exp. (4), e198, doi:10.3791/198 (2007).