Flash Congelamento e criosezionamento E12.5 cervello di topo

Summary

Dimostrato in questo video sono le tecniche per flash congelamento e sezionamento del tessuto embrionale del cervello di topo. Consigli utili per l'utilizzo del criostato sono dati, compresi i metodi di risoluzione dei problemi che possono essere utilizzati durante il taglio per assicurare che le sezioni risultanti tessuti sono privi di crepe e altre distorsioni.

Protocol

Fissare il tessuto in paraformaldeide 4% in PBS per il tempo desiderato. Saccarosio infondere tessuto (crioprotezione) Preparare la soluzione di saccarosio al 30% in PBS w / v nel 2059 tubo. Lavare il tessuto in PBS 3x (~ 5 min con dondolo). Tessuto posto in soluzione di saccarosio al 30%. Tessuto non affonderà. Posizionare il tessuto in 4 ° C durante la notte, o fino a quando è affondata. Dimensione etichetta appropriata cryomold con informazioni e orientamento. <…

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
Tissue-Tek Cryomold		Ted Pella, Inc.	27181
O.C.T.		Ted Pella, Inc	27050
Sucrose solution				30% sucrose solution in PBS w/v
paraformaldehyde				4% paraformaldehyde in PBS