Flash-Freezing und Kryoschneiden E12.5 Gehirn der Maus
Summary
Nachgewiesene in diesem Video sind die Techniken für Flash Einfrieren und Schneiden embryonalen Hirngewebe von Mäusen. Nützliche Tipps für die Verwendung des Kryostaten gegeben sind, einschließlich Methoden zur Problembehandlung, mit denen während des Schneidens, um sicherzustellen, dass das resultierende Gewebe Abschnitte frei von Rissen und anderen Verzerrungen können.
Protocol
Fix Gewebe in 4% Paraformaldehyd in PBS für die gewünschte Zeit. Sucrose ziehen Gewebe (Gefrierschutz) Machen Sie 30% Saccharose-Lösung in PBS w / v in 2059 Rohr. Das Gewebe spülen 3x in PBS (~ 5 min mit Schaukeln). Legen Gewebe in 30% Saccharose-Lösung. Tissue wird nicht sinken. Legen Sie das Gewebe in 4 ° C über Nacht oder bis es gesunken ist. Label entsprechender Größe cryomold mit Information und Orientierung. Füllen cryomold mit OCT (Luftblase…
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Tissue-Tek Cryomold | Ted Pella, Inc. | 27181 | ||
| O.C.T. | Ted Pella, Inc | 27050 | ||
| Sucrose solution | 30% sucrose solution in PBS w/v | |||
| paraformaldehyde | 4% paraformaldehyde in PBS |
Citer Cet Article
Currle, D. S., Monuki, E. S. Flash Freezing and Cryosectioning E12.5 Mouse Brain. J. Vis. Exp. (4), e198, doi:10.3791/198 (2007).