Isolating Stammzellen aus Soft-Gewebe des Bewegungsapparates
Summary
Isolating adulten Stammzellen aus Muskel-Skelett Weichteile auf der Grundlage der Zelle Einhaltung Geschwindigkeit Kolben.
Abstract
Adulte Stammzellen sind seit langem in Bezug auf ihre Anwendung in der regenerativen Medizin diskutiert. Adulte Stammzellen haben eine große Aufregung für die Behandlung von verletzten und erkrankten Geweben durch ihre beeindruckenden Fähigkeiten, um multi-lineage Zelldifferenzierung und ihre Selbst-Erneuerung unterzogen Fähigkeit generiert. Am wichtigsten ist, haben diese Eigenschaften machten sie vorteilhaft für die Verwendung bei der autologen Stammzelltransplantation Therapien. Das aktuelle Protokoll wird der Leser auf die veränderten Vorbeschichtungszyklus Technik, bei der Weichteile des Bewegungsapparates, zB Sehnen und Muskeln, sind 1 einführen<sup> St</sup> Enzymatisch gespalten und dann in Kollagen beschichtet Kolben mit Medium. Der Überstand, der mittleren und die restlichen schwimmenden Zellen zusammengesetzt ist, ist seriell übertragen täglich zu neuen Flaschen. Die Stammzellen sind die langsamsten auf die Kolben, welche dauert in der Regel beträgt 5-7 Tage (serielle Übertragungen oder preplates) einzuhalten. Durch den Einsatz dieser Technik, präsentieren adulten Stammzellen in diesen Geweben kann leicht durch relativ nicht-invasive Verfahren gewonnen werden.
Protocol
Discussion
Es wurde erkannt, dass einige adulten Geweben mehrere Stammzellen enthalten. In den letzten Jahren des Studiums, haben Stammzellen in das weiche Gewebe des Bewegungsapparates, einschließlich Skelettmuskel und Sehne festgestellt. Das aktuelle Protokoll Einzelheiten eines Verfahrens, wie die modifizierte Vorbeschichtungszyklus Technik, die bereits erfolgreich in unserem Labor verwendet werden, um adulte Stammzellen aus Sehnen und Skelettmuskulatur zu isolieren bekannt. Mit dem modifizierten Vorbeschichtungszyklus Technik…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Die Autoren sind dankbar für die Frau Haiying Pan und Herr Ian Bellayr für die technische Hilfe auf Zellisolation für den aktuellen Filmen und Mr. Kyle Holden und Mr. Jonathan Lucas für ihre Hilfe auf Folie bearbeiten. Vielen Dank an die folgende Liste von Personen, die mit der Entwicklung der modifizierten Vorbeschichtungszyklus Techniken in den letzten Jahren beteiligt waren: Drs. Burhan Gharaibeh, Baohong Cao, Deasy Bridget, Thomas R. Payne, Aiping Lu, Hairong Peng, Hideki Oshima, Bo Zeng, Xiaodong Mu, Kimimasa Tobita, Ron Jankowski, Makato Ikezawa. Wir sind dankbar für die technische Unterstützung von James H. Cummins, Ryan Pruchnic, Joseph Feduska, Rebecca C. Schugar, Haiying Pan und Jessica Tebbets. Der Autor möchte auch die finanzielle Unterstützung für diese Arbeit von der Gesellschaft für Muskeldystrophie (MDA), der National Institutes of Health (NIH), das Department of Defense (DOD), dem Kinderkrankenhaus von Pittsburgh von UPMC, das Department of anerkennen Orthopädische Chirurgie und der University of Pittsburgh.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| DMEM | Invitrogen | #11995-073 | ||
| FBS | Invitrogen | #10437-028 | ||
| Heat-inactivated horse serum | Invitrogen | #26050-088 | ||
| Chick embryo extract | Accurate Chemical | #CE650T-10 | ||
| 100U ml penicillin/streptomycin | Invitrogen | #15140-122 | ||
| Dulbecco’s PBS | Invitrogen | #14190-250 | ||
| Hank’s Buffered Salt Solution | Invitrogen | #24020-117 | ||
| Collagenase type XI 0.2%(wt/vol) | Sigma-Aldrich | #C7657 | ||
| Dispase2.4U ml | Invitrogen | #17105-041 | ||
| Trypsin-EDTA0.5%(wt/vol) (10x;5g liter trypsin (1:250) | Invitrogen | #15400-054 | ||
| Collagen for coating flask : Type I collagen derived from calf skin 0.1 g liter | Sigma-Aldrich | #C-9791 | ||
| DMSO | Sigma | #D-2650 |
References
- Gharaibeh, B. Isolation of a slowly adhering cell fraction containing stem cells from murine skeletal muscle by the preplate technique. Nat Protoc. 3, 1501-1509 (2008).
- Qu-Petersen, Z. Identification of a novel population of muscle stem cells in mice: potential for muscle regeneration. J Cell Biol. 157, 851-864 (2002).
- Li, Y. &. a. m. p. ;. a. m. p., Huard, J. Differentiation of muscle-derived cells into myofibroblasts in injured skeletal muscle. Am J Pathol. 161, 895-907 (2002).
- Watt, D. J., Lambert, K., Morgan, J. E., Partridge, T. A. &. a. m. p. ;. a. m. p., Sloper, J. C. Incorporation of donor muscle precursor cells into an area of muscle regeneration in the host mouse. J Neurol Sci. 57, 319-331 (1982).
- Lu, A. Isolation of myogenic progenitor populations from Pax7-deficient skeletal muscle based on adhesion characteristics. Gene Ther. 15, 1116-1125 (2008).
- Lee, J. Y. Clonal isolation of muscle-derived cells capable of enhancing muscle regeneration and bone healing. J Cell Biol. 150, 1085-1100 (2000).
- Cao, B. The role of receptors in the maturation-dependent adenoviral transduction of myofibers. Gene Ther. 8, 627-637 (2001).
- Cao, B. Muscle stem cells differentiate into haematopoietic lineages but retain myogenic potential. Nat Cell Biol. 5, 640-646 (2003).
- Huard, J. Regenerative medicine based on muscle stem cells. J Musculoskelet Neuronal Interact. 8, (2008).
- Gates, C. B., Karthikeyan, T., Fu, F. &. a. m. p. ;. a. m. p., Huard, J. Regenerative medicine for the musculoskeletal system based on muscle-derived stem cells. J Am Acad Orthop Surg. 16, 68-76 (2008).
