Larval lymfekjertel disseksjon: Isolerer Drosophila Hemocyte-produserende organ
Published: April 30, 2023
Abstract
Kilde: Reimels, T. A. og Pfleger, C.M. Metoder for å undersøke lymfekjertel og hemocytter i Drosophila Larver. J. Vis. Utt. (2016).
Denne videoen beskriver Drosophila-lymfekjertelen – det primære stedet for hematopoiesis i fluelarven – og viser et eksempelprotokoll for å dissekere og montere orgelet for immunhiistokjemi og fluorescerende avbildning.
Protocol
Denne protokollen er et utdrag fra Reimels og Pfleger, Metoder for å undersøke lymfekjertel og hemocytter i Drosophila Larver, J. Vis. Exp. (2016). 1. Larval lymfekjertelimohistokjemi MERK: Lymfekjertelen ligger omtrent en tredjedel lengde fra den fremre enden av en larve litt under hjernen på dorsalsiden. (Se pilen i figur 1B.) Lymfekjertelen flankerer dorsalkaret og er …
Representative Results
Figur 1: In Vivo Crystal Cell Melanization. A) Larver ble plassert individuelt i PCR-rør før oppvarming. Røde piler indikerer larver som ikke er på bunnen av rørene. B) Et typisk krystallcelle melaniseringsmønster etter oppvarming, som noen ganger avslører lymfekjertelen (pil; dorsal side vist, fremre er igjen). Skalalinjen representerer 1 mm. <a href="https://www.jove.com…
Materials
| PBS tablets | MP Biomedicals | 2810305 | |
| dissecting dish | Corning | 7220-85 | |
| microcentrifuge tube | Denville | C2170 | |
| silicone dissecting pad, made from Sylgard 184 kit | Krayden (distributed through Fisher) | NC9644388 (Fisher catalog number) | Made in petri dish by mixing components of Sylgard elastomer kit according to manufacturer instructions. |
| stereomicroscope | Morrell Instruments (Nikon distributor) | mna42000, mma36300 | Nikon models SMZ1000 and SMZ645 |
| tissue wipe | VWR | 82003-820 | |
| forceps | Electron Microscopy Sciences | 72700-DZ | |
| p200 pipette | Eppendorf | 3120000054 | |
| formaldehyde | Fisher | BP531-500 | |
| Triton | Fisher | BP151-500 | |
| Tween 20 | Fisher | BP337-500 | |
| bovine serum albumin | Rocky Mountain Biologicals | BSA-BSH-01K | |
| normal goat serum | Sigma | G9023-10ML | |
| normal donkey serum | Sigma | D9663-10ML | |
| 200 proof ethanol | VWR | V1001 | |
| N-propyl gallate | MP Biomedicals | 102747 | |
| glycerol | VWR | EM-4750 | |
| DAPI (4',6-diamidino-2-phenylindole) | Fisher | 62248 | |
| microscope cover glass, 18 mm circular | Fisher | 12-545-100 | |
| glass microscope slides | Fisher | 22-034-980 | |
| 24-well plate | Corning | 351147 | |
| disposable transfer pipet | Fisher | 13-711-9AM | |
| fluorescence microscope | Zeiss | Axio Imager.Z1 |
Cite This Article
Larval Lymph Gland Dissection: Isolating the Drosophila Hemocyte-Producing Organ. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20117, doi: (2023).