हम झुकने filamentous जीवाणु के लिए सेलुलर झुकने कठोरता को मापने के लिए एक ऑप्टिकल जाल के साथ एक कवर पर्ची सतह से जुड़ी कोशिकाओं के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं.
हम एक filamentous छड़ के आकार के बैक्टीरिया के झुकने कठोरता को मापने के लिए प्रोटोकॉल विकसित किया है. बल एक ऑप्टिकल जाल, प्रकाश की एक सूक्ष्म तीन आयामी बनाया है कि वसंत का गठन किया है जब एक उच्च तीव्रता लेजर बीम एक खुर्दबीन के उद्देश्य लेंस के द्वारा एक बहुत छोटी जगह पर ध्यान केंद्रित है के साथ लागू कर रहे हैं. एक सेल मोड़, हम पहली बार एक रासायनिक इलाज coverslip बाँध जीवित बैक्टीरिया. के रूप में इन कोशिकाओं के विकास, कोशिकाओं के बीच coverslip करने के लिए बाध्य रहता है, लेकिन बढ़ रही समाप्त होता है इस संयम से मुक्त कर रहे हैं. दवा cephalexin साथ filamentous विकास उत्प्रेरण करके, हम करने के लिए कोशिकाओं में जो सेल के एक छोर की सतह के लिए अटक गया था जबकि दूसरे छोर स्वाधीन बने रहे और झुकने बलों को अतिसंवेदनशील की पहचान करने में सक्षम हैं. एक झुकने बल तो एक polylysine लेपित मनका एक से बढ़ सेल की टिप करने के लिए बाध्य है एक ऑप्टिकल जाल के साथ लागू होता है. दोनों बल और मनका के विस्थापन दर्ज कर रहे हैं और सेल के झुकने कठोरता इस रिश्ते की ढलान है.
प्रोटोकॉल यहाँ प्रस्तुत करने के लिए मात्रात्मक बैक्टीरियल कोशिकाओं के झुकने गुणों को मापने के लिए डिज़ाइन किया गया है. प्रयोग सेटअप कि filamentously बढ़ने के लिए बनाया जा सकता है किसी भी छड़ के आकार का कक्ष के लिए लागू किया जा सकता है. हम सफलतापूर्वक इस सेटअप का इस्तेमाल किया है ई. के झुकने कठोरता पर cytoskeletal filaments के प्रभाव की जांच कोलाई कोशिकाओं. यह वही तकनीक दबाव, कोशिका दीवार और कक्षों की कुल झुकने कठोरता निर्धारित करने में कठोरता अन्य intracellular घटकों की भूमिका का मूल्यांकन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है.
The authors have nothing to disclose.
हम Mingzhai सूर्य से सतहों के लिए बाध्य कोशिकाओं पर उपयोगी सलाह को स्वीकार करते हैं. हम बहुमूल्य विचार – विमर्श के लिए नेड Wingreen और Zemer Gitai धन्यवाद. इस शोध स्वास्थ्य अनुदान P50GM07150 के राष्ट्रीय संस्थानों, राष्ट्रीय विज्ञान फाउंडेशन कैरियर पुरस्कार बनावट – 0,844,466 और अल्फ्रेड पी. स्लोअन फाउंडेशन द्वारा समर्थित किया गया था.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
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cephalexin | Sigma | C4895-5G | ||
polyethylenimine | Sigma | 181978-5G | ||
polylysine | Sigma | P8920 | ||
0.5-μm-diameter polystyrene beads | Bangs Laboratory | PS03N | ||
Nano-LP Series nanopositioning system | Mad City Labs | NanoLP series | http://www.madcitylabs.com/nanolpseries.html |