Vi presenterar ett protokoll för bockning fintrådiga bakterieceller knuten till en cover-slip yta med en optisk fälla för att mäta cellulär böjstyvhet.
Vi utvecklade ett protokoll för att mäta böjning styvhet av fintrådiga stavformade bakterier. Anbringas med en optisk fälla, en mikroskopisk tredimensionell fjäder av ljus som bildas när en högintensiv laserstråle fokuseras till en mycket liten fläck av ett mikroskop är objektiv. Att böja en cell binder vi först levande bakterier till ett kemiskt behandlade täckglas. Eftersom dessa celler växer, är mitt i cellerna bundna till täckglas, men de växande ändar är fria från denna återhållsamhet. Genom att inducera fintrådiga tillväxt med läkemedlet cefalexin, kan vi identifiera celler där ena änden av cellen satt fast på ytan medan den andra änden var lös och är mottagliga för bockning styrkor. En böjning kraft tillämpas sedan med en optisk fälla genom att binda en polylysine-belagd pärla till toppen av en växande cell. Både kraft och den förskjutning av pärla registreras och böjstyvhet i cellen är lutningen av denna relation.
Protokollet som presenteras här är utformade för att kvantitativt mäta böjning egenskaper bakterieceller. Det experimentet kan tillämpas på alla stav-formade celler som kan göras för att växa filamentously. Vi har framgångsrikt använt denna inställning för att undersöka effekterna av cytoskelettala filament på böjstyvhet i E. coli celler. Samma teknik kan användas för att utvärdera roller tryck, cellvägg stelhet och andra intracellulära komponenter för att bestämma totala böjstyvhet av celler.
The authors have nothing to disclose.
Vi erkänner goda råd från Mingzhai Sun på bindande celler till ytor. Vi tackar Ned Wingreen och Zemer Gitai för värdefulla diskussioner. Denna forskning stöds av National Institutes of Health bidrag P50GM07150, National Science Foundation KARRIÄR utmärkelse PHY-0.844.466 och Alfred P. Sloan Foundation.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
cephalexin | Sigma | C4895-5G | ||
polyethylenimine | Sigma | 181978-5G | ||
polylysine | Sigma | P8920 | ||
0.5-μm-diameter polystyrene beads | Bangs Laboratory | PS03N | ||
Nano-LP Series nanopositioning system | Mad City Labs | NanoLP series | http://www.madcitylabs.com/nanolpseries.html |