Drosophila 후기 단계 난모세포의 면역 염색은 난모세포의 주변 막 때문에 도전적인 증명할 수 있습니다. 이 비디오는 면역 스테인닝을 위한 난출물, 고정 및 멤브레인제거를 얻기 위한 고처리량 방법을 설명합니다. 이 프로토콜은 다양한 단계의 메이오시스를 시각화하는 데 사용되는 후기 단계 난모세포로 이러한 기술을 보여줍니다.
Protocol
이 프로토콜은 래드포드와 맥킴, 고정형 드로소필라 오사이클테스, J. Vis. Exp에서메이오시스 I의 이미징 프로메타페이즈와 메타상을 위한 기술에서 발췌된다. (2016). 참고: 별도로 명시되지 않는 한 절차는 실온에서 수행됩니다. 온도 조절 인큐베이터는 달리 언급하지 않는 한 플라이 리어잉 및 크로스온도를 유지하는 데 사용됩니다. <p c…
Representative Results
마약 용매 재고 농도 최종 농도 치료 시간 효과 콜치친 에탄올 125 mM 150 μM 10분 또는 30분 비키네토초레 불안정 (10 분)또는 모든 (30 분) 마이크로 투?…
Materials
16% formaldehyde
Ted Pella, Inc.
18505
HAZARDOUS; once opened, discard after one month
250 ml beakers
Various
5 ml tubes
Various
active dry yeast
Various
mix with water to make a paste the consistency of peanut butter
Binucleine 2
Sigma
B1186
HAZARDOUS
blender
Various
bovine serum albumin
Sigma
A4161
calcium chloride
Various
colchicine
Sigma
C-9754
HAZARDOUS
coverslips
VWR
48366-227
No. 1 1/2
DMSO
Various
EGTA
Various
ethanol
Various
forceps
Ted Pella, Inc.
5622
Dumont tweezers high precision grade style 5
glass slides
VWR
48312-003
glucose
Various
HEPES
VWR
EM-5330
available from several venders
magnesium chloride
Various
large mesh (~1,500 µm)
VWR
AA43657-NK
variety of formats and other suppliers, 12 or 14 mesh
small mesh (~300 µm)
Spectrum labs
146 424
variety of formats, e.g., 146 422 or 146 486
nutator
Various
Pasteur pipets
Various
potassium acetate
Various
Cacodylic acid
Sigma
C0125
HAZARDOUS; alternatively, sodium cacodylate may be substituted
Preparation of Fixed Drosophila Oocytes for Immunostaining: A High-Throughput Method to Fix and Remove the Outer Membrane. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20122, doi: (2023).