Dissektion des Midgut von einer Erwachsenenfliege: Eine Methode zur Isolierung des Verdauungstraktes
Published: April 30, 2023
Abstract
Quelle: Tauc, H.M., et al. Isolating Intestinal Stem Cells from Adult Drosophila Midguts by FACS to Study Stem Cell Behavior During Aging. J. Vis. (2014).
In diesem Video zeigen wir eine Zerlegung des erwachsenen Drosophila-Darms und die Sammlung von Mittelguts, die für die einzellige Dissoziation und FACS geeignet sind, um Darmstammzellen zu isolieren.
Protocol
Dieses Protokoll ist ein Auszug aus Tauc et al., Isolating Intestinal Stem Cells from Adult Drosophila Midguts by FACS to Study Stem Cell Behavior During Aging, J. Vis. Exp. (2014). HINWEIS: Wenn dieses Protokoll zum ersten Mal verwendet wird, um ISCs durch FAC-Sortierung zu isolieren, sind die folgenden Kontrollen obligatorisch, um die FACS-Parameter zunächst richtig einzustellen: Dissoziierte Zellen vom Wildtyp (z.B….
Materials
| Forceps: Dumont, Inox Biologie #5 | Fine Science Tools | 11252-20 | |
| SefarNitex 03-150um/38 (35 µm nylon mesh) | Sefar | 3A03-0150-102-00 | |
| Falcon 5 ml Round Bottom Polystyrene Test Tube with Cell Strainer Snap Cap | Corning | 352235 | |
| Polymax 1040 | Heidolph | 543-42210-00 | |
| Albumin from bovine serum (BSA) | Sigma | A4503-50G | |
| 0.5% Trypsin-EDTA | Invitrogen | 15400-054 | Trypsin obtained from a different company most likely has a different activity and the duration of the trypsin digest has to be adjusted accordingly. |
| SYTOX Blue Dead Cell Stain for flow cytometry | Life Technologies | S34857 | |
| RNAlater Stabilization Solution | Life Technologies | AM7023 | Other solutions, e.g., Trizol can be used for subsequent RNA isolation |
| FACSAria II cell sorter | Becton Dickinson | Turn on one hour prior to sorting |
Citer Cet Article
Dissection of the Midgut from an Adult Fly: A Method for Isolating the Digestive Tract. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20150, doi: (2023).