Рассечение Мидгута от взрослой мухи: метод изоляции пищеварительного тракта

Abstract

Источник: Tauc, H.M., et al. Изолировать кишечные стволовые клетки от взрослых Drosophila Midguts FACS для того чтобы изучить поведение стволовой клетки во время вызревания. J. Vis. Exp. (2014).

В этом видео мы подчеркиваем вскрытие взрослого кишечника дрозофилы и сбор мидгутов, пригодных для одноклеточной диссоциации и FACS для того, чтобы изолировать кишечные стволовые клетки.

Protocol

Этот протокол является выдержка из Tauc и др.., Изоляция кишечных стволовых клеток от взрослых Drosophila Midguts по FACS для изучения поведения стволовых клеток во время старения, J. Vis. Exp. (2014). ПРИМЕЧАНИЕ: Если этот протокол используется впервые для изол…

Materials

Forceps: Dumont, Inox Biologie #5	Fine Science Tools	11252-20
SefarNitex 03-150um/38 (35 µm nylon mesh)	Sefar	3A03-0150-102-00
Falcon 5 ml Round Bottom Polystyrene Test Tube with Cell Strainer Snap Cap	Corning	352235
Polymax 1040	Heidolph	543-42210-00
Albumin from bovine serum (BSA)	Sigma	A4503-50G
0.5% Trypsin-EDTA	Invitrogen	15400-054	Trypsin obtained from a different company most likely has a different activity and the duration of the trypsin digest has to be adjusted accordingly.
SYTOX Blue Dead Cell Stain for flow cytometry	Life Technologies	S34857
RNAlater Stabilization Solution	Life Technologies	AM7023	Other solutions, e.g., Trizol can be used for subsequent RNA isolation
FACSAria II cell sorter	Becton Dickinson		Turn on one hour prior to sorting