Enzymatische spijsvertering en handmatige dissociatie: een methode om C. elegans-embryo's voor celcultuur te bereiden

Published: April 30, 2023

Abstract

Bron: Sangaletti, R. and Bianchi, L. A Method for Culturing Embryonic C. elegans Cells. J.Vis. Exp. (2013). 

Deze video introduceert een methode om embryonale C. eleganscellen in vitro te isoleren en steriel te gekweekt.

Protocol

1. Embryonale cellen dissociatie Voer de volgende stappen van de procedure uit onder steriele omstandigheden met behulp van een laminaire stroomkap. Terwijl dieren toga op bacteriënplaten zijn, moeten de wasbeurten en de behandeling met de lysis-oplossing die bleekmiddel bevat, de meeste, zo niet alle bacteriën elimineren. Zo voorkomt het gebruik van een laminaire kap op dit punt van de procedure nieuwe verontreiniging van de eisuspensie. Resuspend gepelde eieren in 1 ml chitinase v…

Representative Results

Figuur 1. C. elegans embryo’s voor en na chitinase behandeling. A) Foto van eieren vóór blootstelling aan chitinase. De pijl wijst naar de transparante en intacte eierschaal rond een embryo. (B) Eieren behandeld met chitinase gedurende 10 minuten. De eierschalen zijn verteerd en zijn niet meer zichtbaar rond de embryo’s. De pijlen wijzen naa…

Materials

REAGENTS
Leibovitz's L-15 Medium (1x) Liquid Invitrogen 11415-064
Fetal Bovine Serum Invitrogen 16140-063
Penicillin-streptomycin Sigma P4333-100ML
Chitinase from Streptomyces Griseus Sigma C6137-25UN
Peanut Lectin Sigma L0881-10MG
EQUIPMENT
101-1000 μl Blue Graduated Pipet Tips USA Scentific 1111-2821
10 ml Sterilized Pipet Individually Wrapped USA Scentific 1071-0810
Ergonomic Variable Volume (100-1000 μl) Pipettor with tip ejector VWR International Inc. 89079-974
Portable Pipet Aid, Drummond VWR International Inc. 53498-103
Transfer Plastic Pipet Sterile VWR International Inc. 14670-114
15 ml Conical Tube USA Scentific 1475-1611
Sterile 18 gauge Needles Becton, Dickinson and Co. 305196
Sterile 10 ml Syringes Becton, Dickinson and Co. 305482
Plastic Syringe Filters Corning 0,20 μm pore size Corning 431224
Acrodic 25 mm Syringe filter w/5 μm versapor Membrane VWR International Inc. 28144-095
60×15 mm Petri Dish Sterile VWR International Inc. 82050-548
100×15 mm Petri Dish Sterile VWR International Inc. 82050-912
12 mm Diameter Glass Coverslips VWR International Inc. 48300-560
Clear Cell Culture Plates 24 Well Flat Bottom w/lid Thomas scientific 6902A09
Dumont #5- Fine Forceps Fine Science Tools 11254-20
Centrifuge 5702 Eppendorf 22629883
Laminar Flow Hood
Inverted Microscope with x10 objective
Ambient air humidified Incubator

Play Video

Citer Cet Article
Enzymatic Digestion and Manual Dissociation: A Method to Prepare C. elegans Embryos for Cell Culture. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20159, doi: (2023).

View Video