Digestione enzimatica e dissociazione manuale: un metodo per preparare embrioni C. elegans per la coltura cellulare

Published: April 30, 2023

Abstract

Fonte: Sangaletti, R. e Bianchi, L. A Metodo per la coltivazione delle cellule embrionali C. elegans. J. Vis. Exp. (2013). 

Questo video introduce un metodo per isolare e coltura sterile le cellule embrionali C. elegans in vitro.

Protocol

1. Dissociazione delle cellule embrionali Eseguire i passaggi successivi della procedura in condizioni sterili utilizzando una cappa di flusso laminare. Mentre gli animali sono vestiti su piastre batteriche, i lavaggi e il trattamento con la soluzione di lisi contenente candeggina dovrebbero eliminare la maggior parte se non tutti i batteri. Pertanto, l’utilizzo di una cappa laminare a questo punto della procedura previene la nuova contaminazione della sospensione dell’uovo. Resuspend…

Representative Results

Figura 1. C. embrioni elegani prima e dopo il trattamento con chitinasi. (A) Fotografia delle uova prima dell’esposizione alla chitinasi. La freccia punta al guscio d’uovo trasparente e intatto che circonda un embrione. (B) Uova trattate con chitinasi per 10 minuti. I gusci d’uovo sono stati digeriti e non sono più visibili intorno agli embri…

Materials

REAGENTS
Leibovitz's L-15 Medium (1x) Liquid Invitrogen 11415-064
Fetal Bovine Serum Invitrogen 16140-063
Penicillin-streptomycin Sigma P4333-100ML
Chitinase from Streptomyces Griseus Sigma C6137-25UN
Peanut Lectin Sigma L0881-10MG
EQUIPMENT
101-1000 μl Blue Graduated Pipet Tips USA Scentific 1111-2821
10 ml Sterilized Pipet Individually Wrapped USA Scentific 1071-0810
Ergonomic Variable Volume (100-1000 μl) Pipettor with tip ejector VWR International Inc. 89079-974
Portable Pipet Aid, Drummond VWR International Inc. 53498-103
Transfer Plastic Pipet Sterile VWR International Inc. 14670-114
15 ml Conical Tube USA Scentific 1475-1611
Sterile 18 gauge Needles Becton, Dickinson and Co. 305196
Sterile 10 ml Syringes Becton, Dickinson and Co. 305482
Plastic Syringe Filters Corning 0,20 μm pore size Corning 431224
Acrodic 25 mm Syringe filter w/5 μm versapor Membrane VWR International Inc. 28144-095
60×15 mm Petri Dish Sterile VWR International Inc. 82050-548
100×15 mm Petri Dish Sterile VWR International Inc. 82050-912
12 mm Diameter Glass Coverslips VWR International Inc. 48300-560
Clear Cell Culture Plates 24 Well Flat Bottom w/lid Thomas scientific 6902A09
Dumont #5- Fine Forceps Fine Science Tools 11254-20
Centrifuge 5702 Eppendorf 22629883
Laminar Flow Hood
Inverted Microscope with x10 objective
Ambient air humidified Incubator

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Citer Cet Article
Enzymatic Digestion and Manual Dissociation: A Method to Prepare C. elegans Embryos for Cell Culture. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20159, doi: (2023).

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