الطبقات أجار تصاعد: إعداد الأجنة حمار وحشي لايف للتصوير على المدى الطويل مع المجهر مقلوب
Published: April 30, 2023
Abstract
المصدر: أوبادياي س.، et.al. وهناك طريقة تصاعد الطبقات لتمديد الوقت الفاصل Confocal المجهر من أجنة حمار وحشي كله. ج. فيس إكسب. (2020).
توضح هذه المقالة طريقة لتركيب أجنة حمار وحشي حية للتصوير على المدى الطويل. هذه الطريقة فعالة من حيث التكلفة وسهلة الأداء باستخدام الأطباق المجهرية العادية ذات القاع الزجاجي للتصوير على المجهر المقلوب. يتم تنفيذ التركيب في طبقات من الآغاروز بتركيزات مختلفة.
Protocol
1. إعداد الأجنة بعد التزاوج، حصاد الأجنة في E3 في طبق بيتري واحتضانها في 26.5 درجة مئوية لحوالي 28 ساعة قبل تصاعد.ملاحظة: وهذا يبطئ تطور الأجنة بحيث تكون الأجنة في مرحلة 30 سوميت تقريبا في بداية التصوير. تخدير الأجنة في 0.016-0.020٪ Tricaine في E3. لتثبيط التصبغ، أضف وحدة الإ…
Representative Results
الشكل 1 : وصف طريقة التركيب. (أ) إضافة جنين حمار وحشي إلى البئر الصغيرة التي تم إنشاؤها بواسطة القاع الزجاجي في طبق 35 ملم. (ب) إضافة طبقة الآغاروز 1 إلى البئر الصغيرة لتغطية الجنين. (ج) وضع بعناية غطاء الزجاج على البئر الصغيرة. (د) إضافة طبقة…
Materials
| Low melting agarose | Sigma-Aldrich, MO | A9414 | Store dissolved solution at 4 °C |
| 35 mm glass bottom dishes with No. 0 coverslip and 10 mm diameter of glass bottom | MatTek Corporation, MA | P35GCOL-0-10-C | |
| Tricaine (MS-222) | Sigma-Aldrich, MO | E10521 | Store dissolved solution at 4 °C |
| N-phenylthiourea (PTU) | Sigma-Aldrich, MO | P7629 | Store dissolved solution at -20 °C |
| DMC4500 digital microscope camera | Leica | NA | |
| Micro cover glass 22×22 mm | VWR | 48366 067 |
Citer Cet Article
Layered Agar Mounting: Preparing Live Zebrafish Embryos for Long-Term Imaging with an Inverted Microscope. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20186, doi: (2023).