Montage de gélose en couches : préparation d’embryons de poisson-zèbre vivants pour l’imagerie à long terme avec un microscope inversé

Résumé

Source : Upadhyay S., et.al. Une méthode de montage en couches pour la microscopie confocale à intervalle de temps étendu d’embryons entiers de poisson-zèbre. J. Vis. Exp. (2020).

Cet article décrit une méthode pour monter des embryons de poisson-zèbre vivants pour l’imagerie à long terme. Cette méthode est rentable et facile à mettre en œuvre à l’aide de boîtes de microscopie à fond de verre ordinaires pour l’imagerie au microscope inversé. Le montage est effectué en couches d’agarose à différentes concentrations.

Protocole

1. Préparation des embryons

1. Après l’accouplement, récoltez les embryons en E3 dans une boîte de Pétri et incubez-les à 26,5 °C pendant environ 28 h avant de les monter.
   note: Cela ralentit le développement des embryons, de sorte que les embryons sont environ à 30 somites au début de l’imagerie.
2. Anesthésie les embryons dans 0,016-0,020 % de tricaïne dans E3. Pour inhiber la pigmentation, ajoutez du PTU à une concentration de 200 μM.
3. Déchorionner les embryons à l’aide d’une pince sous un microscope à dissection. À l’aide de deux pinces, saisissez et écartez doucement le chorion pour libérer l’embry....

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Agarose à faible point de fusion	Sigma-Aldrich, Missouri	A9414	Conserver la solution dissoute à 4 °C
Plats à fond en verre de 35 mm avec lamelle n° 0 et diamètre du fond en verre de 10 mm	MatTek Corporation, Massachusetts (États-Unis	P35GCOL-0-10-C
Tricaïne (MS-222)	Sigma-Aldrich, Missouri	E10521	Conserver la solution dissoute à 4 °C
N-phénylthiourée (PTU)	Sigma-Aldrich, Missouri	Réf. P7629	Conserver la solution dissoute à -20 °C
DMC4500 appareil photo microscope numérique	Leica	Na
Micro verre de protection 22x22 mm	VWR	Référence 48366 067

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