Questo video descrive l’isolamento delle cellule staminali tumorali dalle linee cellulari del cancro al seno. Coltimiamo queste cellule staminali tumorali per generare mammosfere primarie per valutare l’auto-rinnovamento e calcolare l’efficienza di formazione delle sfere, consentendo il confronto tra diverse densità di semina.
Protocol
1. Generazione di mammosfere primarie dalle linee cellulari del cancro al seno umano NOTA: Eseguire i seguenti passaggi sotto una cappa di coltura sterile. Preparare i supporti mammosfera contenenti DMEM/F12 integrati con 2 mM di L-glutammina, 100 U/ml di penicillina, 100 U/ml di streptomicina. Preparare il supporto completo immediatamente prima dell’uso aggiungendo 20 ng/ml di fattore di crescita epidermico umano ricombinante (FEG; Sigma), fattore di crescita dei fi…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Materials
DMEM/F12
Lonza
CC-3151
2 mM L-glutamine
Sigma Aldrich
G8540
100 U/ml Penicillin & Streptomycin
Sigma Aldrich
P4083
20 ng/ml Recombinant human epidermal growth factor (EGF)
Sigma Aldrich
E9644
20 ng/ml Recombinant human basic fibroblast growth factor (bFGF)