Questo video descrive un saggio di formazione di colonie di agar morbido per testare gli effetti di un inibitore enzimatico PADI e BB-Cl-amidina sulla tumorigenicità del cancro al seno in vitro. Questo saggio consente anche la valutazione quantitativa del potenziale di trasformazione cellulare nel contesto delle perturbazioni genetiche.
Protocol
1. Preparazione del 3% 2-idrossietile Agarose In una bottiglia di vetro pulita e asciutta da 100 ml, aggiungere 0,9 g di agarosio 2-idrossietile (Agarosio VII) seguito da 30 ml di acqua distillata. Microonde la miscela per 15 secondi e ruotare delicatamente. Ripetere questo passaggio almeno altre tre volte fino a quando la polvere di agarosio si dissolve completamente. Autoclave il flacone contenente la soluzione per 15 min. Lasciare raffreddare la soluzione di agarosio in RT prima…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Materials
Zeiss Axiopot
Carl Zeiss Microscopy
1021859251
Inverted Microscope
Olympus
CKX41
DMEM/F-12
Lonza BioWhittaker
12-719F
HyClone Donor Equine Serum
Fisher Scientific
SH30074.03
Penicillin Streptomycin
Life Technologies
15140-122
2-Hydroxyethylagarose: Type VII, low gelling temperature
Soft Agar Colony Formation Assay: A Method to Test Effects of Novel Compounds on Cancer Cell Proliferation. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20226, doi: (2023).