하드 chorion 부드러운 배아, medaka의 배아의 조작으로 인해 더 zebrafish에 비해 참여합니다. 이 비디오는 chimeras의 생산을위한 이미징 및 세포 이식에 대한 아가로 오스의 장착 dechorionation 포함한 medaka의 배아를 조작하는 방법에 대한 단계별 절차를 나타냅니다. 이러한 절차는 척추 게놈 기능의 유전자 해부 위해 상호 보완적인 기능을 최대한 활용하기 위해 실험실에서 medaka와 zebrafish를 사용하는 필수적입니다.
Medaka는 유전자와 embryological 모두 분석이 가능하고 게놈 차원의 표현형 기반 돌연변이 화면이 1을 실시했다하는 세 개의 척추 모델 생물 중 하나입니다 작은 달걀 – 누워있는 민물고기이다. medaka와 zebrafish 사이의 관련 유전자의 기능 중복의 발산 따라서 단일 종 2 medaka 및 zebrafish는 척추 게놈 기능의 유전자 해부에 대한 보완으로 식별할 아르 소설 phenotypes의 신분을 수 있습니다. 같은 dechorionation 같은 medaka의 배아, 이미징 및 세포 이식에 대한 설치 배아의 조작은 실험실에서 medaka와 zebrafish 모두에서 작동하는 주요 절차입니다. 세포 이식은 medaka의 돌연변이 세포 자율성을 검사합니다. Chimeras는 레이블이 지정되지 않은받는 사람 배아에 기증자의 배아에서 세포를 이식 라벨에 의해 생성됩니다. 기증자 세포는 이식 세포의 클론이 개발 중에 관심의 조직에 통합 될 수 있도록 운명지도 3을 기반으로받는 사람 배아의 특정 영역에 이식 수 있습니다. 하드 chorion 부드러운 배아, medaka의 배아의 조작으로 인해 더 zebrafish에 비해 참여합니다. 이 비디오에서는, 우리는 medaka의 배아를 조작하는 자세한 절차를 보여줍니다.
이 비디오에서는 dechorionate 및 medaka의 배아에서 세포 transplanataion을 수행하는 방법을 보여줍니다. 이것은 개발하는 동안 유전자 / 단백질의 기능 연구뿐만 아니라 유전자 / 해당 단백질의 자율성을 elucidating위한 키메라 배아를 생산하는 강력한 기술입니다. Medaka는 생체내 실시간 영상에 잘에 잘 구축 운명을지도하고 투명 대출로 인해이 기술에 대한 유용한 척추 모델 시스템입니다. 이식은 이식 세포의 행동이 쉽게 관찰 할 수 있도록 microinjection (같이 함께 조브 프로토콜 'Medaka 배아들 중 Microinjection'에 명시된)와 함께하실 수 있습니다.
The authors have nothing to disclose.
이 작품은 MRC에서 M. FS에 부여에 의해 지원됩니다.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
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Embryo medium | Reagent | Made in-house | N/A | 200ml 50X stock solution, 1ml 1%methyleneblue in H2O/10 liter RO water (50X stock solution: NaCl 14.7g, KCl 0.6g, CaCl2 2H2O 2.4g, MgSO4 7H2O 4.0g/1 litre RO water.) |
Micro-dissecting forceps | Tools | 55 INOX A.DUMONT&FILS | N/A | Very sharp fine tips for removal of chorion. |
Fine waterproof sandpaper – p2000 grit size | Tools | Hermes Abrasives Ltd. | N/A | Very fine grit size for rolling/cleaning embryos with chorions. |
3% methylcellulose | Reagent | Sigma | M 0512 | High viscosity for holding embryos in place during transplantation. |
1X BSS | Reagent | Made in-house | N/A | 20XBSS: 130g NaCl, 8g KCl, 4g MgSO4.7H2O, 4g CaCl2.2H2O, and 10mg Phenol Red in 1L MilliQ water and autoclave; 500mM Hepes in MilliQ water autoclaved. Add 25ml 20XBSS and 15ml 500ml Hepes pH7.0, fill up to 500ml and filter sterilize before use. |
Penicillin-streptomycin | Reagent | Gibco | 15140-122 | Added to BSS when incubating dechorionated embryos. |
Pronase | Reagent | Calbiochem | 53702 | For dechorionation. |
Hatching enzyme | Reagent | Made in-house | N/A | For dechorionation. |
Tricaine mesilate (TMS) | Reagent | Sigma | A-5040 | 400mg tricaine in 97.9ml distilled water and 2.1ml 1M Tris, pH adjusted to 7; 4.2ml of this solution in 100ml clean tank water. |
3% ultra-low gelling temp. agarose | Reagent | Sigma | A-2576 | Type IX-A. Used during embedding of embryos for observation. |
Petri dish culture chamber | Tool | Iwaki, Asahi Techno Glass Corp. | 11-004-008 | Iwaki glass base dish 35mm with 12mm window. Used during embedding of embryos for observation. |
Micromanipulator | Equipment | Narishige | N/A | Model MN151. For removal and insertion of cells during transplantation. |
Borosilicate glass capillaries | Tool | Harvard Apparatus | GC100-10T | For making transplantation needles. |
Flaming/Brown micropipette puller | Equipment | Sutter Instrument Co. | Model P-97 | For making transplantation needles. |