Cette vidéo va montrer des méthodes pour induire des infections de souris transurethrally des voies urinaires et de quantifier l'ampleur des infections résultant.
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Article de méthode
Induction transurétrale d'infection des voies urinaires souris
Dans cet article
Résumé
Résumé
Souches uropathogènes bactériennes d'intérêt sont cultivés sur gélose. Généralement, uropathogènes
Protocole
I. Préparation de sonde urétrale
- Pour chaque vessie et du rein de souris à échantillonner, placez 5-6 billes en acier inoxydable (vessie, 1,6 mm ou de 0,9 à 2,0 la taille mélange mm) ou des billes d'oxyde de zirconium (rein, 0,5 mm taille) dans un tube cryovial, respectivement. Autoclaver les tubes de perles contenant.
- Après les tubes refroidir à température ambiante, ajouter 200 microlitres de PBS stérile à chaque acier billes contenant le tube inox et 400 microlitres de PBS stérile à chaque oxyde de perles tube contenant du zirconium.
- Nous préparons sonde urétrale décrite par Hung et Hultgren 13. Autoclave une paire propre ....
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Discussion
L'induction d'infection des voies urinaires de la souris par inoculation transurétrale de bactéries est une procédure établie de longue date, mais techniquement exigeante 11. Hung et Hultgren récemment publié une excellente analyse des techniques d'infection des voies transurétrale de souris urinaires 13. Dans ce papier, nous tentons d'illustrer davantage les subtilités de cette approche expérimentale.
Les novices peuvent pratiquer leur technique en réal.......
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Déclarations de divulgation
Aucun conflit d'intérêt déclaré.
Remerciements
Les auteurs tiennent à remercier Shelly Xie et Jennifer Payne pour leur assistance technique d'experts. Ce travail a été rendu possible grâce à des subventions de la Société d'urologie pédiatrique et le Fonds de recherche de Stanford en pédiatrie.
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| Tubes cryogéniques, 2,0 ml en polypropylène (sans bouchons) | E&K Scientific | 640201 | |
| Bouchons pour tubes cryogéniques, avec joint torique ’O’ | E&K Scientific | 440011-N | |
| Bullet Blender | Next Advance | BBX24 | |
| Perles d'oxyde de zirconium (0,5 mm) | Next Advance | ZROB05 | |
| Perles en acier inoxydable (1,6 mm) | Next Advance | SSB16 | |
| Mélange de perles en acier inoxydable (0,9-2,0 mm) | Next Advance | SSB14B | |
| Souris CBA/J femelles, âgées de 8 à 12 semaines | Jackson Laboratory | 000656 | |
| Solution saline tamponnée au phosphate (NaCl 137 mM, KCl 2,7 mM, Na2HPO4 4,3 mM, KH2PO4 1,4 mM) | EMD Millipore | EM-SX0420-13 (NaCl) EM-PX1405-1 (KCl) EM1.06585.0 (Na2HPO4) EM-5108-1 (KH2PO4) | |
| Agar LB | |||
| Bouillon LB | EMD Millipore | 1.10285.0500 | |
| Isoflurane (Aerrane) | Baxter Internationl Inc. | NDC 10019-773-60 | |
| Platines d'inoculation | Fisher Scientific | 22-363-601 | |
| Poudre d'agar éosine-méthylène bleu (EMB) | Himedia Laboratories | MM022-500G | |
| Poudre d'agar MacConkey | Difco Laboratories | 212123 | |
| Poudre d'agar LB | Difco Laboratories | 244520 | |
| Tubulure en polyéthylène non radiopaque Intramedic, PE10 [diamètre intérieur 0,28 mm (0,011 pouce) ; diamètre extérieur 0,61 mm (0,024 pouce)] | BD Biosciences | 427401 | |
| Aiguilles 30 gauge, 1/2 pouce | BD Biosciences | 305106 | |
| Seringue tuberculinique de 1 ml à embout Slip-Tip | BD Biosciences | 309602 | |
| Seringue Luer-Lock de 3 ml | BD Biosciences | 309585 |
Références
- Schaeffer, A. J., Schwan, W. R., Hultgren, S. J., Duncan, J. L. Relationship of type 1 pilus expression in Escherichia coli to ascending urinary tract infections in mice. Infect Immun. 55, 373-380 (1987).
- Rouschop, K. M. Urothelial C....
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Réimpressions et autorisations
