Трансуретральная Индукция Мышь инфекции мочевыводящих путей
Summary
Это видео продемонстрирует методы transurethrally вызвать мыши инфекции мочевыводящих путей и количественной оценки степени в результате инфекции.
Abstract
Уропатогенных штаммов бактерий, представляющих интерес, выращенные на агаре. Как правило, уропатогенных<em> Е. палочки</em> (УПЭК), а также другие штаммы могут быть выращены на ночь на Лурия-Бертани (LB) агаре при 37 ° С в окружающем воздухе. УПЭК штаммы растут как желтовато-белые полупрозрачные колонии на LB агар. После подтверждения соответствующих морфологии колонии, отдельные колонии, затем взял быть культурным в бульоне. Л. Б. бульон может быть использован для большинства уропатогенных штаммов бактерий. Два последовательных, ночевка культур бульон LB может быть использован для повышения выражение типа я пили, четко определенных факторов вирулентности уропатогенных бактерий. Отвар культуры разбавляют до необходимой концентрации в фосфатном буферном растворе (PBS). От восьми до 12 недель старых самок мышей находятся под наркозом и изофлуран transurethrally инокулированных бактерий использованием полиэтиленовой трубы покрытые 30 шприцов колеи. Типичные инокулята, которая должна быть эмпирически определяется для каждого бактериального / мышь напряжение комбинации, 10<sup> 6</sup> До 10<sup> 8</sup> КОЕ на мышь в 10 до 50 мкл PBS. После желаемого инфекции периода (одного дня до нескольких недель), мочи и мочевого пузыря и обе почки собирают. Каждый орган фарш, размещенных в PBS, и гомогенизируют в синий гомогенизатор Bullet. Моча и тканей гомогенатах серийно разводили в PBS и культивировали на соответствующие агара. На следующий день, колониеобразующих единиц учитываются.
Protocol
Discussion
Индукция мыши инфекции мочевыводящих путей с помощью трансуретральной инокуляции бактерий давние, но технически сложная процедура 11. Хунг и Hultgren недавно опубликовал прекрасный обзор трансуретральной техники мыши инфекции мочевыводящих путей 13. В этой статье мы попытаемс…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Авторы хотели бы поблагодарить Шелли Се и Дженнифер Payne для их экспертной технической помощи. Эта работа стала возможной благодаря грантам от общества детской урологии и исследований Стэнфордского детской фонд.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Cryovial tubes, 2.0 ml polypropylene (no caps) | E&K Scientific | 640201 | ||
| Caps for cryovial tubes, with ‘O’ ring | E&K Scientific | 440011-N | ||
| Bullet Blender | Next Advance | BBX24 | ||
| Zirconium Oxide Beads (0.5mm) | Next Advance | ZROB05 | ||
| Stainless Steel Beads (1.6mm) | Next Advance | SSB16 | ||
| Stainless Steel Bead Blend (0.9-2.0mm) | Next Advance | SSB14B | ||
| CBA/J Mice, 8-12 week old female | Jackson Laboratories | 000656 | ||
| Phosphate Buffered Saline (NaCl 137mM, KCl 2.7mM, Na2HPO4 4.3mM, KH2PO4 1.4mM) | EMD | EM-SX0420-13 (NaCl) EM-PX1405-1 (KCl) EM1.06585.0 (Na2HPO4) EM-5108-1 (KH2PO4) | ||
| LB agar | ||||
| LB broth | EMD | 1.10285.0500 | ||
| Isoflurane (Aerrane) | Baxter | NDC 10019-773-60 | ||
| Inoculating loops | Fisher Scientific | 22-363-601 | ||
| Eosin-methylene blue (EMB) agar powder | Himedia Laboratories | MM022-500G | ||
| MacConkey agar powder | Difco | 212123 | ||
| LB agar powder | Difco | 244520 | ||
| Intramedic non-radiopaque polyethylene tubing, PE10 [inner dimension 0.28 mm (0.011 inch); outer dimension 0.61 mm (0.024 inch)] | BD Biosciences | 427401 | ||
| 30 gauge needles, 1/2 inch | BD Biosciences | 305106 | ||
| 1 ml tuberculin Slip-Tip syringe | BD Biosciences | 309602 | ||
| 3 ml Luer-Lock syringe | BD Biosciences | 309585 |
References
- Schaeffer, A. J., Schwan, W. R., Hultgren, S. J., Duncan, J. L. Relationship of type 1 pilus expression in Escherichia coli to ascending urinary tract infections in mice. Infect Immun. 55, 373-380 (1987).
- Rouschop, K. M. Urothelial CD44 facilitates Escherichia coli infection of the murine urinary tract. J Immunol. 177, 7225-7232 (2006).
- Malaviya, R., Ikeda, T., Abraham, S. N. Contribution of mast cells to bacterial clearance and their proliferation during experimental cystitis induced by type 1 fimbriated E. coli. Immunol LettM. 91, 103-111 (2004).
- Lane, M. C., Alteri, C. J., Smith, S. N., Mobley, H. L. Expression of flagella is coincident with uropathogenic Escherichia coli ascension to the upper urinary tract. Proc Natl Acad Sci U S A. 104, 16669-16674 (2007).
- Hvidberg, H. Development of a long-term ascending urinary tract infection mouse model for antibiotic treatment studies. Antimicrob Agents Chemother. 44, 156-163 (2000).
- Hopkins, W. J., Hall, J. A., Conway, B. P., Uehling, D. T. Induction of urinary tract infection by intraurethral inoculation with Escherichia coli: refining the murine model. J Infect Dis. 171, 462-465 (1995).
- Hopkins, W. J., Gendron-Fitzpatrick, A., Balish, E., Uehling, D. T. Time course and host responses to Escherichia coli urinary tract infection in genetically distinct mouse strains. Infect Immun. 66, 2798-2802 (1998).
- Gunther, N. W. t., Lockatell, V., Johnson, D. E., Mobley, H. L. In vivo dynamics of type 1 fimbria regulation in uropathogenic Escherichia coli during experimental urinary tract infection. Infect Immun. 69, 2838-2846 (2001).
- Bishop, B. L. Cyclic AMP-regulated exocytosis of Escherichia coli from infected bladder epithelial cells. Nat Med. 13, 625-630 (2007).
- Thumbikat, P., Waltenbaugh, C., Schaeffer, A. J., Klumpp, D. J. Antigen-specific responses accelerate bacterial clearance in the bladder. J Immunol. 176, 3080-3086 (2006).
- Hagberg, L. Ascending, unobstructed urinary tract infection in mice caused by pyelonephritogenic Escherichia coli of human origin. Infect Immun. 40, 273-283 (1983).
- Hopkins, W. J., Hall, J. A., Conway, B. P., Uehling, D. T. Induction of urinary tract infection by intraurethral inoculation with Escherichia coli: refining the murine model. J Infect Dis. 171, 462-465 (1995).
- Hung, C. S., Dodson, K. W., Hultgren, S. J. A murine model of urinary tract infection. Nat Protoc. 4, 1230-1243 (2009).
