集積光と原子間力顕微鏡による研究機械的刺激に対する細胞応答を生きる
Summary
本論文では、培養中の生細胞の機械的刺激のための統合された原子間力光学イメージング顕微鏡の操作で、リーダーに指示することを目指しています。ステップバイステップのプロトコルが表示されます。機械的な刺激に生細胞の応答を示す代表的なデータセットが表示されます。
Abstract
高い空間分解能と時間分解能を持つサブ細胞レベルでの細胞の挙動を調査することができる新技術、生きている細胞は機械的な力を感知するメカニズムを理解するために、およびそれらがどのように対応し、その環境に適応することは開発されました。このように、原子間力顕微鏡（AFM）は、全内部反射蛍光（全反射）顕微鏡と高速回転ディスク（FSD）共焦点顕微鏡と統合されました。統合されたシステムは、リアルタイムでの機械的刺激への細胞応答の直接光イメージングを可能にする、任意の付着生細胞における分子動力学研究の広い範囲にわたって広く適用可能である。アクチンフィラメントと接着斑の大幅な再編成が原因で、細胞体全体の細胞構造に変化を誘導することが頂端細胞の表面での局所力学刺激することが示された。これらの革新的な技術は、機械的な力に反応して生細胞の再構築とダイナミクスを理解するための新たな情報を提供します。機械的な刺激にショーの生細胞応答が記載されている詳細なプロトコールと代表的なデータセット。
Protocol
Discussion
細胞骨格7-10と接着斑11-16細胞が移動または機械的な力17に対応するように、組み立て分散とめくる動的な構造です。彼らは、細胞増殖、生存、および遺伝子発現の調節において重要な機能を持っています。彼らの特定の分布と動態を知ることは、細胞がマトリックスで、自分自身との間の通信方法のより良い理解を提供します。
この新しい顕微鏡…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
ビンキュリン- GFPプラスミドは、歯科および頭蓋顔面研究所の国立研究所のケネス山田、国立衛生研究所から贈られた、プラスミドベセスダ、メリーランド州、およびアクチン- MRFPはマイケルソン、フロリダ州立大学、タラハシー、フロリダ州から寄贈されたもの。
この作品は、Andreea TracheにNSFのキャリア賞＃0747334とAHA -ナショナルSDG＃0835205Nによってサポートされていました。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| AFM tip | Novascan Technologies | 2 micron Borosilicate bead, 0.01N/m, Biotin Surface | ||
| avidin | Sigma Aldrich | A9275 | 1mg/mL in DPBS | |
| Fibronectin | Sigma Aldrich | F4759 | 1 mg/mL | |
| DPBS | Invitrogen | 21600-051 | ||
| Amaxa transfection kit for Smooth Muscle Cells | Lonza | VPI-1004 | ||
| Mattek glass bottom dishes | MatTek Corporation | P60G-1.5-30-F | Sterile 60mm Falcon dishes with glass bottom coverslip no. 1.5 |
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