트렌스 제닉의 생성 C. 엘레간스 Biolistic 변환에 의해
Summary
유전자 변형 벌레는 일반적으로 사용됩니다<em> C. 엘레간스</em> 연구. 설명은 DNA – 코팅 금 입자와 biolistic 폭격을 사용하여 웜로 transgenes을 소개, 효과 아직 간단한 프로토콜입니다. 참여 노력과 폭격의 결과는 유전자 변형 동물의 생성을 위해 microinjection과 호의를 비교합니다.
Abstract
무료 생활 선충류의 C.를 사용하는 실험실의 개수 엘레간스이 급속도로 성장하고있다. 이 생물 학적 모델의 인기는 빠른 세대 시간과 짧은 수명, 간단하고 저렴한 유지 보수, 완전 합성 게놈과 RNAi 자원과 돌연변이 동물의 배열에 따라 결정됩니다. C.의 또한, 분석 엘레간스 게놈은 벌레의 연구는 전체 생쥐이나 교양 세포에서 수행한 연구에 중요한 부가 될 수 있다고 제안 웜 이상의 척추 동물 사이 좋은 유사를 공개했다. 웜 연구의 강력하고 중요한 부분은 유전자 현지화 및 기능을 연구하기 위해 유전자 변형 동물을 사용하는 능력입니다. 유전자 변형 동물 중 웜 germline의 microinjection을 통해 또는 biolistic 폭격의 사용을 통해 만들 수 있습니다. 폭격 새로운 기술이며, 실험실의 숫자로 덜 익숙한 것입니다. 여기서 우리는 바이오 래드 PDS – 1000 시스템을 사용 금 입자와 충돌하여 biolistic 유전자 변형 벌레를 생성하는 간단한 프로토콜을 설명합니다. 남녀 추니 germline로의 DNA microinjection에 비해,이 프로토콜은 웜 해부학을 식별하거나 microinjection을 수행 관련하여 운영자로부터 특별한 기술을 필요로하지 않는 장점이 있습니다. 또한 여러 형질 라인은 일반적으로 하나의 충격에서 얻을 수 있습니다. 또한 microinjection에 대조적으로, biolistic 폭격 extrachromosomal 배열과 통합 transgenes 모두 유전자 변형 동물을 생산하고 있습니다. 통합 형질 라인을 얻을 수있는 능력은 외국 DNA를 통합하는 mutagenic 프로토콜의 사용을 피할 수 있습니다. 결론적으로, biolistic 폭격 특히 microinjection에 숙련되기 위해 필요한 시간과 노력을 투자에 관심이없는 조사에 대해, 유전자 변형 동물의 생성을 위해 매력적인 방법으로하실 수 있습니다.
Protocol
Discussion
Biolistic 폭격 C. 포함한 많은 생물에 외국의 DNA를 소개하는 간단한 방법입니다 엘레간스 1,5,6,7,16. 그것은 CaCl 2의 면전에서 DNA와 복잡한를 형성 금 입자에 의존하고 있습니다. 같은 spermidine과 같은 양이온 polyamines은 생체내의 nuclease 저하로부터 DNA를 보호합니다. spermidine는 불안 정한 분자이기 때문에, 그것은 -20 ° C에서 작은 aliquots에 저장하고, 바로 폭격을 수행하기 ?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 작품은 ALF에 피츠버그, NIH 교부금 AG028977 대학에서 씨앗 기금에 의해 지원되었다
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Gold particles | Inbio gold | BD021 | 1micron | |
| Midiprep kit | Qiagen | 12143 | ||
| Spermidine | Sigma | S4139 | ||
| Protamine | Sigma | P4505 | ||
| Macrocarriers | Biorad | 165-2335 | ||
| PDS-1000/He Hepta System | Biorad | 165-2257 | ||
| Rupture disk | Biorad | 165-2330 | ||
| Nystatin | Sigma | N1638 | ||
| Streptomycin | MP | 100556 |
References
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