细菌提供的RNAi效应：Transkingdom RNA干扰
Summary
RNA干扰（RNAi）技术为基础的疗法的发展，一种新型的战略发展，transkingdom RNA干扰（tkRNAi）。该技术使用非致病性细菌产生并传递到靶细胞治疗短发夹RNA（shRNA）。在这里，tkRNAi成功地应用于古典ABCB1介导的多药耐药（MDR）的癌细胞逆转。
Abstract
RNA干扰（RNAi）代表一个特定的mRNA表达抑制的高效机制。除了其作为一个功能强大的实验室工具的潜力，RNAi途径似乎是有希望的治疗利用。对于RNA干扰（RNAi）技术为基础的治疗，交付的发展RNA干扰调解剂对靶细胞的主要障碍之一。一种新的策略，以克服这一障碍是transkingdom RNA干扰（RNAi的TK）。这种技术采用非致病性细菌，如大肠杆菌 ，产生并传递到靶细胞治疗短发夹RNA（shRNA）诱导的RNAi。第一代TK的RNAi介导载体，跳闸，含有噬菌体T7启动子表达调控治疗的shRNA利益。此外，行程由耶尔森氏菌pseudotuberculosis发票编码invasin的轨迹，允许自然的非侵入性细菌进入β1整合素阳性哺乳动物细胞和单核细胞增生李斯特菌HlyA基因，产生listeriolysin O.这种酶可以使治疗的shRNA摆脱项囊泡内的靶细胞的细胞质中。 TRIP结构是一个称职的非致病性大肠埃希氏菌菌株，编码T7 RNA聚合酶对T7启动子驱动的shRNA的合成所必需的引入。一个良好的特点与癌症相关的，针对不同的RNAi战略目标分子是ABCB1（MDR1/P-glycoprotein，MDR1/P-gp）。这ABC转运行为，作为药物挤压泵和调解“经典”ABCB1 -介导的多药耐药（MDR）的特点是由一个特定的交叉耐药模式的人类癌症细胞的表型。不同的ABCB1表达MDR肿瘤细胞治疗与反ABCB1 shRNA表达载体轴承 E. 大肠杆菌 。此过程导致癌细胞内的RNAi途径激活一个相当大的下调ABCB1编码的mRNA以及相应的药物挤出泵的。因此，增强药物蓄积在质朴的耐药癌细胞MDR表型逆转。通过这种模式，数据提供的证据的概念，TK RNAi是适用于癌症相关的因素，如ABCB1在人类癌细胞中，调制。
Protocol
Discussion
接种感染的细胞数和相应的教学语言的使用，关键取决于下观察细胞系，他们的增长速度。为了找到最佳的手机号码，播种，预实验，以确定的速度增长，强烈推荐。除此之外，不同的水分应进行测试，由于有限的延长，细胞可以站立，没有压力的死亡细菌的入侵。下观察基因的下调可能会有所不同的最佳时间点。建议执行超过一定的时间来寻找最佳条件内实验。
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
授予没有工作是支持的。 01GU0615的“Bundesministerium献给Forschung和TECHNOLOGIE（BMBF）的。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Agar | Biochrom AG | 214050 | ||
| Amphotericin B | Biochrom AG | A2612 | ||
| Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline-PBS (10 x) | Invitrogen GmbH | 14080048 | ||
| E. coli ceq221 | Cequent Pharmaceuticals Inc. | No catalogue available, direct order | ||
| Gentamycin | Biochrom AG | A2710 | ||
| Penicillin/Streptomycin | Invitrogen GmbH | Contains 5,000 units of penicillin (base) and 5,000 μg of streptomycin (base)/ml utilizing penicillin G (sodium salt) and streptomycin sulfate in 0.85% saline. | ||
| Sodium chloride | Merck KgaA | 1064060500 | ||
| Tryptone | Difco Laboratories | 211705 | ||
| Yeast Extract | Difco Laboratories | 212750 |
References
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