Il organotipica ippocampale Cultura Modello Slice per l'esame di danno neuronale
Summary
Il organoptypic dell'ippocampo modello cultura fetta è un<em> In vitro</emModello> utilizzato per esaminare danno neuronale in una varietà di paradigmi. In questo articolo, si descrivono i metodi per la generazione di culture fetta e quantificare danno neuronale.
Abstract
Organotipica cultura fetta ippocampo è un metodo in vitro per esaminare i meccanismi di danno neuronale, in cui l'architettura di base e la composizione dell 'ippocampo è relativamente preservata 1. Il sistema di coltura organotipica consente l'esame degli effetti neuronali, astrociti e microglia, ma come preparazione ex vivo, non affronta gli effetti del flusso sanguigno, o reclutamento di cellule infiammatorie periferiche. A tal fine, questo metodo cultura viene spesso utilizzato per esaminare lesioni eccitotossico e ipossia ai neuroni piramidali dell'ippocampo, ma è stato utilizzato anche per esaminare la risposta infiammatoria. Qui si descrivono i metodi per la generazione di culture fetta dell'ippocampo dal cervello di roditori dopo la nascita, l'amministrazione stimoli tossici per indurre danno neuronale, e il saggio e la morte dei neuroni dell'ippocampo quantificare.
Protocol
Discussion
Ci sono due punti importanti da seguire per garantire risultati riproducibili e coerenti quando si replica esperimenti. In primo luogo, è importante lasciare che l'età dell'ippocampo fette per 12-14 giorni prima della sperimentazione. Con isolamento fetta, vi è una significativa risposta della microglia, e microglia rimangono attivi per un certo tempo, con un ritorno ad uno stato di riposo ramificata che si verificano di giorno 10 in vitro 3,6. In secondo luogo, intensità media PI fluores…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Finanziato dal NINDS, American Heart Association, American Federation for Aging Research, March of Dimes
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