El organotípicos rebanada hipocampo modelo de cultivo para el examen de la lesión neuronal
Summary
El organoptypic modelo del hipocampo es una parte la cultura<em> In vitro</em> Modelo para examinar el daño neuronal en una variedad de paradigmas. En este artículo se describen los métodos para la generación de culturas de corte y la cuantificación de la lesión neuronal.
Abstract
Cultivo organotípico parte del hipocampo es un método in vitro para examinar los mecanismos de lesión neuronal en el que es relativamente la arquitectura básica y la composición del hipocampo conserva una. El sistema de cultivo organotípico permite el examen de los efectos neuronales, astrocitos y microglia, sino como una preparación ex vivo, no se refiere a los efectos del flujo sanguíneo, o el reclutamiento de células inflamatorias periféricas. A tal fin, este método de cultivo se utiliza con frecuencia para examinar una lesión excitotóxica y de hipoxia en las neuronas piramidales del hipocampo, sino que también ha sido utilizado para examinar la respuesta inflamatoria. En este documento se describen los métodos para la generación de las culturas del hipocampo sector a partir de cerebro de roedores después del parto, la administración de estímulos tóxicos para inducir daño neuronal, y analizando y cuantificando la muerte neuronal del hipocampo.
Protocol
Discussion
Hay dos puntos importantes a seguir para asegurar resultados reproducibles y consistentes al replicar los experimentos. En primer lugar, es importante que la edad rodajas de hipocampo de 12-14 días antes de la experimentación. Con el aislamiento de corte, hay una respuesta microglial significativa, y microglia permanecerá activada durante un tiempo, con un retorno a un estado de reposo ramificado que ocurre a los 10 días in vitro 3,6. En segundo lugar, la intensidad media de fluorescencia PI es p…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Financiado por el NINDS, Asociación Americana del Corazón, Federación Americana de Investigación del Envejecimiento, March of Dimes
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