अध्ययन Axon ग्रोथ पर Glial सेल विविधता प्रभाव एक नई coculture विधि का प्रयोग
Summary
इस प्रोटोकॉल में, हम एक नई विधि का वर्णन करने के लिए एक साथ अक्षतंतु विकास पर glial सेल विविधता के प्रभाव का अध्ययन<em> इन विट्रो में</em> सिस्टम सह संस्कृति. चूहा cortical glial कोशिकाओं संगम सुसंस्कृत थे और अत्यधिक चूहे पृष्ठीय रूट ganglia न्यूरॉन्स शुद्ध के साथ cocultured. न्यूरॉन्स आसंजन और अक्षतंतु विकास पर विभिन्न glial सेल प्रभाव सीधे एक ही संस्कृति की तुलना में किया गया था. इस विधि सीधे न्यूरॉन आसंजन और अक्षतंतु विकास पर glial सेल विविधता प्रभाव का अध्ययन करने के लिए एक नया तरीका उपलब्ध कराता है.
Abstract
सभी स्तनधारियों की केंद्रीय तंत्रिका तंत्र में चोट के बाद कटे axons करने के लिए अपने मूल लक्ष्य और कार्यात्मक वसूली को पुनर्जीवित करने में असमर्थ रहे हैं बहुत ही गरीब है 1. अक्षतंतु उत्थान की विफलता glial सेल शत्रुतापूर्ण वातावरण, निरोधात्मक माइलिन संबंधित अणुओं और आंतरिक न्यूरॉन पुनर्योजी 2 क्षमता कम सहित कई कारकों के एक संयुक्त परिणाम है. Astrocytes सबसे प्रमुख केंद्रीय तंत्रिका तंत्र में glial सेल प्रकार के होते हैं और अक्षतंतु कार्यों में शरीर विज्ञान और विकृति तीन शर्तों के तहत महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं . मुताबिक़ oligodendrocytes कंट्रास्ट, astrocytes एक विषम सेल जनसंख्या विविध morphologies और जीन अभिव्यक्ति 4 के साथ विभिन्न astrocyte subpopulations द्वारा रचित हैं . इस विविधता के कार्यात्मक महत्व अक्षतंतु विकास पर उनके प्रभावों के रूप में, काफी हद तक अज्ञात है.
Glial सेल, विशेष रूप से न्यूरॉन व्यवहार में astrocyte विविधता के समारोह का अध्ययन करने के लिए, हम उच्च सह – संवर्धन चूहा प्रांतस्था से प्राप्त glial कोशिकाओं के साथ शुद्ध पृष्ठीय रूट ganglia न्यूरॉन्स द्वारा एक नई विधि की स्थापना की. इस तकनीक के द्वारा, हम करने के लिए सीधे एक ही शर्त के तहत विभिन्न astrocytes subpopulations पर न्यूरॉन आसंजन और अक्षतंतु विकास की तुलना में सक्षम थे.
इस रिपोर्ट में, हम astrocytes अलगाव और संस्कृति, पृष्ठीय रूट ganglia न्यूरॉन्स अलगाव और शुद्धि, और astrocytes के साथ न्यूरॉन्स DRG की सह – संस्कृति के लिए इस विधि की विस्तृत प्रोटोकॉल दे. इस विधि को भी अन्य मस्तिष्क क्षेत्रों के लिए बढ़ाया जा सकता है सेलुलर या क्षेत्रीय न्यूरॉन्स और glial कोशिकाओं के बीच विशेष बातचीत का अध्ययन.
Protocol
Discussion
इस प्रयोग प्रोटोकॉल glial कोशिकाओं, न्यूरॉन आसंजन और neurite विकास पर विशेष रूप से astrocyte विविधता के प्रभाव का अध्ययन करने के लिए दो लक्ष्यों तक पहुंचने के लिए डिजाइन किया गया था. पहला लक्ष्य astrocyte जितना संभव हो इस प…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस अध्ययन FMMU नई नींव और आंशिक रूप से एनआईएच धन खोजने के द्वारा समर्थित किया गया.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| DMEM(high glucose) | Invitrogen | 10313-039 | ||
| L15 medium | Invitrogen | 11415-114 | ||
| FBS | Invitrogen | 10437-077 | ||
| Neurobasal Medium | Invitrogen | 21103-049 | ||
| poly-lysine | Sigma | P4832 | culture grade | |
| NGF(2.5S) | Invitrogen | 13257-019 | ||
| B27 supplyment | Invitrogen | 17504-044 | ||
| 0.25% trypsin-EDTA | Invitrogen | 25200-056 | ||
| FUDR | Sigma | F0503 | ||
| neurofilament antibody | Abcam | ab24575 |
References
- Rossignol, S., Schwab, M., Schwartz, M., Fehlings, M. G. Spinal cord injury: time to move?. J Neurosci. 27 (44), 11782-11792 (2007).
- Yiu, G., He, Z. Glial inhibition of CNS axon regeneration. Nat Rev Neurosci. 7 (8), 617-627 (2006).
- Barres, B. A. The mystery and magic of glia: a perspective on their roles in health and disease. Neuron. 60 (3), 430-440 (2008).
- Matyash, V., Kettenmann, H. Heterogeneity in astrocyte morphology and physiology. Brain Res Rev. , (2009).
- Wanner, I. B., Deik, A., Torres, M., Rosendahl, A., Neary, J. T., Lemmon, V. P., Bixby, J. L. A new in vitro model of the glial scar inhibits axon growth. Glia. 56 (15), 1691-1709 (2008).
- Kuffler, D. P., Sosa, I. J., Reyes, O. Schwann cell chondroitin sulfate proteoglycan inhibits dorsal root ganglion neuron neurite outgrowth and substrate specificity via a soma and not a growth cone mechanism. J Neurosci Res. 87 (13), 2863-2871 (2009).
- Kleitman, N., Wood, P. M., Bunge, R. P. Tissue culture method for the study of myelination. Culturing nerve cells. , P559-P559 (1998).
