Visualisation des larves nerfs segmentaires en 3 Rd Instar Drosophile Les préparatifs des larves
Summary
Drosophila melanogaster larves fournir un système modèle idéal pour étudier les mécanismes du transport axonal dans les larves de nerfs segmentaires. En utilisant cette procédure, 3 e stade larvaire porteuses de mutations différentes peuvent être comparés à des larves de type sauvage.
Abstract
Drosophila melanogaster apparaît comme un système modèle puissant pour étudier le développement et la fonction du système nerveux, notamment en raison de sa génétique commode et génome entièrement séquencé. De plus, le système nerveux des larves est un système modèle idéal pour étudier les mécanismes du transport axonal que les nerfs des larves segmentaire contiennent faisceaux d'axones avec leurs corps cellulaires situés dans le cerveau et leurs terminaisons nerveuses finissant le long du corps. Nous décrivons ici la procédure pour la visualisation des protéines des vésicules synaptiques dans les larves de nerfs segmentaires. Si fait correctement, tous les composants du système nerveux, avec des tissus associés tels que les muscles et NMJs, restent intacts, intact et prêt à être visualisé. 3 e stade larvaire porteuses de mutations différentes sont disséqués, fixe, incubées avec des anticorps vésicules synaptiques, visualisées et comparées à des larves de type sauvage. Cette procédure peut être adaptée pour plusieurs anticorps différents synaptique ou neuronales et des changements dans la distribution d'une variété de protéines peuvent être facilement observées au sein des larves nerfs segmentaires.
Protocol
Discussion
Les nerfs des larves de drosophile sont segmentaires un système puissant pour étudier les mécanismes de transport axonal. Si la 3 e stade larvaire dissection est effectuée correctement, toutes les composantes de la CNS, PNS, et des tissus associés, tels que les muscles et les NMJs, peuvent être examinées dans une seule larve. Nous avons adapté ce protocole de celui publié par Hurd et Saxton (1996). Ce protocole peut également être adapté pour tester d'autres anticorps neuronale, mais …
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
SG est soutenu par des fonds de l'Université d'État de New York à Buffalo et de la Fondation John R. Oishei.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Dumont #5 Forceps | Fine Science Tools, Inc. | 11252-20 | ||
| Minutien Pins, Stainless Steel | Fine Science Tools, Inc. | 26002-10 | ||
| Mcpherson-Vannas Straight Blade 8cm Scissors | Fisher Scientific | 50822236 | ||
| Vectashield, Mounting Medium | Vector Laboratories, Inc. | H-1000 | ||
| Sylgard 184 Silicone elastomer | Dow Corning Corporation | 4026148 | ||
| formaldehyde, 16% | Electron Microscopy Sciences | 15710 | ||
| dCSP3 | Developmental Studies Hybridoma Bank | |||
| Alexa Fluor 568 Goat Anti-Mouse IgG | Invitrogen | A-11004 |
References
- Gunawardena, S., Goldstein, L. Disruption of Axonal Transport and Neuronal Viability by Amyoid Precursor Protein Mutations in Drosophila. Neuron. 32 (2), 389-401 (2001).
- Gunawardena, S., Her, L. S., Brusch, R. G., Laymon, R. A., Niesman, I. R., Gordesky-Gold, B., Sintasath, L., Bonini, N. M., Goldstein, L. S. Disruption of axonal transport by loss of huntingtin or expression of pathogenic polyQ proteins in Drosophila. Neuron. 40 (1), 1-2 (2003).
- Hurd, D. D., Saxton, W. M. Kinesin mutations cause motor neuron disease phenotypes by disrupting fast axonal transport in Drosophila. Génétique. 144 (3), 1075-1085 (1996).
- Zinsmaier, K. E., Eberle, K. K., Buchner, E., Walter, N., Benzer, S. Paralysis and early death in cysteine string protein mutants of Drosophila. Science. 263, 977-980 (1994).
