ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर लार्वा एक आदर्श मॉडल लार्वा कमानी नसों के भीतर axonal परिवहन के तंत्र की जांच प्रणाली प्रदान करते हैं. इस कार्यविधि का उपयोग, 3 Rd instar विभिन्न म्यूटेशनों ले जाने के लार्वा को जंगली प्रकार लार्वा की तुलना में किया जा सकता है.
Abstract
ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर और तंत्रिका तंत्र के विकास समारोह के अध्ययन के लिए एक शक्तिशाली मॉडल विशेष रूप से अपने सुविधाजनक आनुवंशिकी और पूरी तरह से अनुक्रम जीनोम की वजह से, सिस्टम के रूप में उभर रहा है. इसके अतिरिक्त, लार्वा तंत्रिका तंत्र एक आदर्श मॉडल प्रणाली axonal परिवहन के तंत्र का अध्ययन करने के रूप में लार्वा कमानी नसों अपने सेल शरीर मस्तिष्क और उनके तंत्रिका टर्मिनलों शरीर की लंबाई के साथ समाप्त होने के भीतर स्थित के साथ axons की बंडलों होते है. यहाँ हम synaptic पुटिका प्रोटीन के लार्वा कमानी नसों के भीतर दृश्य के लिए प्रक्रिया का वर्णन. यदि सही ढंग से किया, तंत्रिका तंत्र के सभी घटकों, जैसे मांसपेशियों और NMJs जुड़े के ऊतकों के साथ साथ, अक्षत, undamaged, और visualized किया जा के लिए तैयार रहना. 3 Rd instar विभिन्न म्यूटेशनों ले लार्वा विच्छेदित कर रहे हैं, तय, synaptic पुटिका एंटीबॉडी के साथ incubated कल्पना और जंगली प्रकार लार्वा की तुलना में. यह प्रक्रिया कई अलग synaptic या neuronal और एंटीबॉडी प्रोटीन की एक किस्म के वितरण में परिवर्तन के लिए अनुकूलित किया जा सकता है आसानी से लार्वा कमानी नसों के भीतर देखा जा.
Protocol
1. अभिकर्मकों की तैयारी 1x विच्छेदन बफर का उपयोग कर 128 मिमी NaCl, 4mm 2 CaCl, 4mm 2 MgCl, 2 KCl मिमी, 5mm HEPES और 36mm Sucrose तैयार करें . पीएच 7.2 समाधान और फिल्टर बाँझ. 16% formaldehyde और 1x विच्छेदन बफर के कमजोर पड़ने 1:01 का उपयोग लगानेवा…
Discussion
ड्रोसोफिला लार्वा कमानी नसों axonal परिवहन तंत्र का अध्ययन करने के लिए एक शक्तिशाली प्रणाली रहे हैं. यदि 3 Rd instar लार्वा विच्छेदन सही ढंग से किया जाता है, CNS, पीएन, और जुड़े ऊतक मांसपेशियों और NMJs जैसे, के स?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
एसजी से भैंस पर न्यूयॉर्क के राज्य विश्वविद्यालय और जॉन आर Oishei फाउंडेशन से धन के द्वारा समर्थित है.
Fye, S., Dolma, K., Jung Kang, M., Gunawardena, S. Visualization of Larval Segmental Nerves in 3rd Instar Drosophila Larval Preparations. J. Vis. Exp. (43), e2128, doi:10.3791/2128 (2010).