Визуализация личинок Сегментные Нервы у 3 Й Инстар Drosophila Подготовка личинок
Summary
Личинки дрозофилы обеспечивают идеальную модель системы для исследования механизмов аксонального транспорта в личиночной сегментарных нервов. Используя эту процедуру, 3-й возраста личинок проведения различных мутаций можно сравнить с диким личинки типа.
Abstract
Дрозофилы становится мощной системой модель для изучения развития и функционирования нервной системы, особенно из-за его удобного генетики и полностью секвенированы генома. Кроме того, личиночной нервной системы является идеальной системой моделью для изучения механизмов аксонального транспорта, а личиночные сегментарные нервы содержат пучки аксонов с их клеточных тел, расположенных в мозге и их нервными окончаниями конец по всей длине тела. Здесь мы опишем процедуру для визуализации белков синаптических пузырьков в личиночной сегментарные нервы. Если все сделано правильно, все компоненты нервной системы, а также связанные тканей, таких как мышцы и NMJs, остается целой, неповрежденной, и готовы быть визуализированы. 3-го возраста личинки перевозки различных мутаций рассеченные, фиксированной, инкубировали с антителами синаптических пузырьков, визуализации и по сравнению с диким типом личинки. Эта процедура может быть адаптирована для различных синаптические или нейронные антител и изменения в распределении различных белков может быть легко наблюдается в течение личиночной сегментарные нервы.
Protocol
Discussion
Дрозофилы личиночной сегментарные нервы мощная система для изучения механизмов в аксонального транспорта. Если 3-го возраста личиночной рассечение выполняется правильно, все компоненты ЦНС, ПНС, и связанные с ними тканей, таких как мышцы и NMJs, могут быть рассмотрены в рамках…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
SG поддерживается за счет средств из государственного университета Нью-Йорка в Буффало и от Джона Р. Oishei Foundation.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Dumont #5 Forceps | Fine Science Tools, Inc. | 11252-20 | ||
| Minutien Pins, Stainless Steel | Fine Science Tools, Inc. | 26002-10 | ||
| Mcpherson-Vannas Straight Blade 8cm Scissors | Fisher Scientific | 50822236 | ||
| Vectashield, Mounting Medium | Vector Laboratories, Inc. | H-1000 | ||
| Sylgard 184 Silicone elastomer | Dow Corning Corporation | 4026148 | ||
| formaldehyde, 16% | Electron Microscopy Sciences | 15710 | ||
| dCSP3 | Developmental Studies Hybridoma Bank | |||
| Alexa Fluor 568 Goat Anti-Mouse IgG | Invitrogen | A-11004 |
References
- Gunawardena, S., Goldstein, L. Disruption of Axonal Transport and Neuronal Viability by Amyoid Precursor Protein Mutations in Drosophila. Neuron. 32 (2), 389-401 (2001).
- Gunawardena, S., Her, L. S., Brusch, R. G., Laymon, R. A., Niesman, I. R., Gordesky-Gold, B., Sintasath, L., Bonini, N. M., Goldstein, L. S. Disruption of axonal transport by loss of huntingtin or expression of pathogenic polyQ proteins in Drosophila. Neuron. 40 (1), 1-2 (2003).
- Hurd, D. D., Saxton, W. M. Kinesin mutations cause motor neuron disease phenotypes by disrupting fast axonal transport in Drosophila. Génétique. 144 (3), 1075-1085 (1996).
- Zinsmaier, K. E., Eberle, K. K., Buchner, E., Walter, N., Benzer, S. Paralysis and early death in cysteine string protein mutants of Drosophila. Science. 263, 977-980 (1994).
