Drosophila melanogaster larver ger en idealisk modell för att undersöka mekanismerna för axonal transport inom larver segmentell nerver. Med hjälp av detta förfarande kan 3: e INSTAR larver bär olika mutationer kan jämföras med vild typ larver.
Abstract
Drosophila melanogaster framstår som en kraftfull modell för att studera utveckling och funktion av nervsystemet, framför allt på grund av dess praktiska genetik och fullt sekvenseras genomet. Dessutom är larver nervsystemet ett idealiskt modellsystem för att studera mekanismer för axonal transport som larver segmentella nerver innehåller buntar av axoner med sin cell kroppar ligger i hjärnan och deras nervterminalerna slut längs kroppen. Här beskriver vi proceduren för visualisering av synaptiska vesikler proteiner inom larver segmentell nerver. Om det görs på rätt sätt, alla komponenter av nervsystemet, tillsammans med tillhörande vävnader som muskler och NMJs, förblir intakt, oskadad, och redo att visualiseras. 3: e INSTAR larver bär olika mutationer är dissekeras, fasta, inkuberas med synaptiska vesikler antikroppar, visualiseras och jämfört med vild typ larver. Detta förfarande kan anpassas för flera olika synaptic eller neuronala antikroppar och förändringar i fördelningen av en mängd olika proteiner kan lätt observeras inom larver segmentell nerver.
Protocol
1. Beredning av reagenser Förbered 1x Dissection buffert med 128 mM NaCl, 4mm CaCl 2, 4mm MgCl 2, 2 mm KCl, 5mm HEPES och 36 mm sackaros. PH lösningen på 7,2 och filtrera sterilisera. Förbered fixativ hjälp 01:01 utspädning om 16% formaldehyd och 1x Dissection buffert. Förbered 1x PBT med 1x Fosfatbuffrad saltlösning (PBS) vid pH 7,2 och Triton X-100 i en 1:100 förhållande. Bered 5% bovint serumalbumin (BSA) med 0,01% Na Azid i 1x PBS. <p…
Discussion
Den Drosophila larver segmentella nerver är ett kraftfullt system för att studera mekanismer i axonal transport. Om den 3: e INSTAR larver dissektion utförs korrekt, kan alla delar av CNS, PNS och tillhörande vävnad, såsom muskler och NMJs, prövas i en enda larv. Vi har anpassat detta protokoll från en publicerad av Hurd och Saxton (1996). Detta protokoll kan också anpassas för att testa andra neuronala antikroppar, men optimering av antikroppar bör göras. Den primära och sekundära anti…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
SG stöds av medel från State University of New York at Buffalo och från John R. Oishei Foundation.
Fye, S., Dolma, K., Jung Kang, M., Gunawardena, S. Visualization of Larval Segmental Nerves in 3rd Instar Drosophila Larval Preparations. J. Vis. Exp. (43), e2128, doi:10.3791/2128 (2010).