Summary

3 Larvaların segmental sinirler Görselleştirme Rd Instar Drosophila Larvaların Hazırlıkları

Published: September 29, 2010
doi:

Summary

Drosophila melanogaster larvaları larva segmental sinirler içinde aksonal taşıma mekanizmalarının araştırılması için ideal bir model sistem sağlar. Bu yordamı kullanarak, 3. instar larvaları çeşitli mutasyonları taşıyan vahşi tip larva mukayese edilebilir.

Abstract

Drosophila melanogaster, özellikle uygun genetik ve tam sıralı genom, sinir sisteminin gelişimi ve işlevi eğitim için güçlü bir model sistem olarak ortaya çıkmaktadır. Ayrıca, larva sinir sistemi, larva segmental sinirler, beyin ve sinir uçları vücut uzunluğu boyunca biten içinde bulunan hücre gövdeleri ile akson demetleri içerir aksonal taşıma mekanizmaları incelemek için ideal bir model sistem. Burada larva segmental sinirler içinde sinaptik vezikül proteinlerin görünüm için prosedürü açıklar. Eğer doğru yapılırsa, sinir sisteminin tüm bileşenleri, kas ve NMJs olarak ilişkili dokuları ile birlikte, sağlam, hasarsız ve görüntülenebilmekte hazır kalır. Çeşitli mutasyonları taşıyan 3. instar larvaları disseke, sabit, sinaptik vezikül antikorlar ile inkübe görüntülendi ve vahşi tip larvalara göre . Bu prosedür, larva segmental sinirler içinde kolayca görülebilir proteinlerin çeşitli dağıtım birkaç farklı sinaptik veya nöronal antikor ve değişiklikler için adapte edilebilir.

Protocol

1. Reaktiflerin hazırlanması 1x Diseksiyon Tampon 128 mM NaCl, 4mm CaCl 2, 4mm MgCl 2, 2 KCl mM, 5mM Hepes ve 36mm Sakkaroz kullanarak hazırlayın. PH 7.2 ve filtre çözüm sterilize edin. Fiksatif% 16 formaldehit ve 1x Diseksiyon Tampon 1:1 seyreltme kullanarak hazırlayın. 1x Fosfat kullanarak hazırlayın 1x PBT Saline (PBS) 1:100 oranında 7.2 ve Triton X-100 PH Tamponlu. Hazırla% 5 1x PBS içinde% 0.01 Azid Na Bovine Serum Albumin (BSA). </ol…

Discussion

Drosophila larva segmental sinirler aksonal taşıma mekanizmaları incelemek için güçlü bir sistem. 3. instar larva diseksiyonu doğru yapılırsa, kas ve NMJs olarak MSS, PNS ve ilişkili doku, tüm bileşenleri tek bir larvanın içinde incelenebilir. Biz bu protokolü Hurd ve Saxton (1996) tarafından yayınlanan bir uyum var. Bu protokol aynı zamanda diğer nöronal antikor testi için adapte olabilir, ancak antikorlar optimizasyonu yapılmalıdır. Primer ve sekonder antikor inkübasyon s?…

Divulgations

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

SG, Buffalo New York Devlet Üniversitesi ve John R. Oishei Vakfı fonları tarafından desteklenmektedir.

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
Dumont #5 Forceps   Fine Science Tools, Inc. 11252-20  
Minutien Pins, Stainless Steel   Fine Science Tools, Inc. 26002-10  
Mcpherson-Vannas Straight Blade 8cm Scissors   Fisher Scientific 50822236  
Vectashield, Mounting Medium   Vector Laboratories, Inc. H-1000  
Sylgard 184 Silicone elastomer   Dow Corning Corporation 4026148  
formaldehyde, 16%   Electron Microscopy Sciences 15710  
dCSP3   Developmental Studies Hybridoma Bank    
Alexa Fluor 568 Goat Anti-Mouse IgG   Invitrogen A-11004  

References

  1. Gunawardena, S., Goldstein, L. Disruption of Axonal Transport and Neuronal Viability by Amyoid Precursor Protein Mutations in Drosophila. Neuron. 32 (2), 389-401 (2001).
  2. Gunawardena, S., Her, L. S., Brusch, R. G., Laymon, R. A., Niesman, I. R., Gordesky-Gold, B., Sintasath, L., Bonini, N. M., Goldstein, L. S. Disruption of axonal transport by loss of huntingtin or expression of pathogenic polyQ proteins in Drosophila. Neuron. 40 (1), 1-2 (2003).
  3. Hurd, D. D., Saxton, W. M. Kinesin mutations cause motor neuron disease phenotypes by disrupting fast axonal transport in Drosophila. Génétique. 144 (3), 1075-1085 (1996).
  4. Zinsmaier, K. E., Eberle, K. K., Buchner, E., Walter, N., Benzer, S. Paralysis and early death in cysteine string protein mutants of Drosophila. Science. 263, 977-980 (1994).

Play Video

Citer Cet Article
Fye, S., Dolma, K., Jung Kang, M., Gunawardena, S. Visualization of Larval Segmental Nerves in 3rd Instar Drosophila Larval Preparations. J. Vis. Exp. (43), e2128, doi:10.3791/2128 (2010).

View Video