छोटे अणुओं लिपिड bilayer गुण को संशोधित करने के लिए संभावित निर्धारण के लिए, Gramicidin आधारित प्रतिदीप्ति परख
Summary
हम एक तेजी से प्रतिदीप्ति आधारित परख कि gramicidin चैनल गतिविधि का एक उपाय के रूप में प्रतिदीप्ति शमन की दर पर नज़र रखता है परिचय. लिपिड bilayer गुणों में परिवर्तन के रूप में bilayer फैले प्रोटीन से महसूस की निगरानी gramicidin चैनल आणविक बल transducers के रूप में उपयोग किया जाता है.
Abstract
कई दवाओं और अन्य छोटे अणुओं के लिए जैविक समारोह मिलाना amphiphiles कि अंतरफलक / bilayer समाधान और जिससे सोखना लिपिड bilayer गुणों को बदलने के हैं. यह महत्वपूर्ण है क्योंकि झिल्ली प्रोटीन energetically hydrophobic बातचीत द्वारा अपने मेजबान bilayer के लिए युग्मित कर रहे हैं. Bilayer गुणों में परिवर्तन इस प्रकार बदल झिल्ली प्रोटीन समारोह है, जो एक अप्रत्यक्ष तरीका है amphiphiles के लिए प्रोटीन समारोह और "लक्ष्य" दवा प्रभाव के लिए एक संभव तंत्र मिलाना प्रदान करता है. हम पहले 3,12 जांच के रूप में रैखिक gramicidin चैनलों का उपयोग लिपिड bilayer गुणों में परिवर्तन का पता लगाने के लिए एक electrophysiological परख विकसित किया है. Gramicidin चैनलों मिनी प्रोटीन दो गैर का आयोजन सब यूनिटों के transbilayer dimerization द्वारा गठित कर रहे हैं. वे उनके झिल्ली पर्यावरण, जो बनाता है उन्हें लिपिड bilayer गुणों में निगरानी परिवर्तन के लिए शक्तिशाली जांच के रूप में bilayer फैले प्रोटीन द्वारा महसूस में परिवर्तन के प्रति संवेदनशील हैं. अब हम जांच के रूप में एक ही चैनल का उपयोग bilayer गुणों में परिवर्तन का पता लगाने के लिए एक प्रतिदीप्ति परख प्रदर्शित करता है. परख fluorophore लोड बड़े unilamellar gramicidin चैनलों के माध्यम से एक पेय के प्रवेश के कारण vesicles से प्रतिदीप्ति शमन के समय पाठ्यक्रम को मापने पर आधारित है. हम प्रतिदीप्ति जोड़ी / सूचक पेय 8 – aminonaphthalene 1 (चींटियों) ,3,6 trisulfonate / Tl + कि सफलतापूर्वक किया गया है अन्य प्रतिदीप्ति शमन assays के 5,13 में इस्तेमाल किया. उपयोग Tl + लिपिड bilayer 8 धीरे permeates लेकिन gramicidin 1,14 चैनलों के संचालन के माध्यम से आसानी से गुजरता है. विधि परिमाप्य और दोनों यंत्रवत अध्ययनों और उच्च throughput bilayer perturbing, और संभावित "बंद लक्ष्य", प्रभाव के लिए छोटे अणुओं की स्क्रीनिंग के लिए उपयुक्त है. हम पाते हैं कि इस पद्धति का उपयोग करके परिणाम पिछले electrophysiological 12 परिणाम के साथ अच्छे समझौते में हैं.
Protocol
Discussion
हम दवाओं और अन्य छोटे amphiphiles के bilayer संशोधित क्षमता का निर्धारण करने के लिए एक तेजी से प्रतिदीप्ति आधारित परख प्रदर्शन किया है. कम्पाउँड कि bilayer गुणों को संशोधित करने के लिए एक अप्रत्यक्ष, nonspecific तरीके से झिल्?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
हम कई उत्तेजक विचार विमर्श के लिए माइकल जे ब्रूनो, Radda Rusinova और जॉन टी. बोरी धन्यवाद. एनआईएच, R01GM021342 और ARRA पूरक R01GM021342 35S1, और योशिय्याह Macy है, जूनियर, ओएसए फाउंडेशन से वित्तीय समर्थन, त्रिकोणीय मैं HII के लिए CMB कार्यक्रम, और परितारिका एल और Leverett एस Woodworth चिकित्सा वैज्ञानिक फैलोशिप और NIH MSTP अनुदान GM07739 आर.के. के लिए.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| ANTS | Invitrogen | A-350 | ||
| gramicidin | Sigma Chemical Co | G-5002 | ||
| 1,2-dierucoyl-sn-glycero-3-phosphocholine | Avanti Polar Lipids | 850398C | ||
| Mini-Extruder kit | Avanti Polar Lipids | 610000 | ||
| PD-10 Desalting column | Sigma-Aldrich Made by GE Healthcare | 54805 |
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