استخدام غيض غرامة micropipettes نحن حقن الحمض النووي البلازميد في المجالات الفرعية من somites الدجاج أو أنابيب العصبية. يتم ضبط تركيز البلازميد لتوليد خلايا transfected واحد. ثم نسمح لتطوير الخلايا في نسيلي السكان.
Abstract
وثمة موضوع محوري في البيولوجيا التطورية هو تنويع الأنساب والكشف عن الآليات الجزيئية الكامنة وراءها. هذا ينطوي على تحليل دقيق لمصير الخلايا واحد في ظل الظروف العادية والتجريبية. تحقيقا لهذه الغاية ، وأساليب ترنسفكأيشن التي تستهدف الأسلاف واحد ، هو شرط مسبق. نحن هنا وصف طريقة بسيطة من الناحية الفنية لtransfecting الخلايا في الأنسجة واحدة الدجاج داخل البيضة ، مما يتيح تتبع النسب موثوق بها ، فضلا عن التلاعب الجيني. وتستهدف مجالات محددة داخل النسيج الجسيدة أو الأنبوب العصبي ، ويتم حقن الحمض النووي مباشرة في ظهارة من الفائدة ، مما أدى إلى ترنسفكأيشن متفرقة من الخلايا واحد. قد تستخدم للصحفيين ، وبالتالي السكان نسيلي أن تعزى لمدة تصل إلى ثلاثة أيام ، ويمكن مقارنة سلوك السكان نسيلي التلاعب وراثيا مع أن من الضوابط. هذا الأسلوب تستفيد من سهولة الحصول على الجنين الفرخ جنبا إلى جنب مع الأدوات التي تبرز للتلاعب الجيني. قارنا ومناقشة مزاياه على طريقة electroporation على نطاق واسع المستخدمة ، والتطبيقات الممكنة واستخدام النماذج في داخل الجسم الحي إضافية واقترحت أيضا. ندعو إلى استخدام هذه الطريقة بمثابة إضافة هامة ومكملة لتعقب النسب الحالية وأدوات التدخل الجيني.
Protocol
1. إعداد Micropipettes نحن لدينا سحب ماصات على Narishige القياسية مجتذب ماصة PP – 83 مع إعداد الحرارة من 13.5. ويجب معايرة الإعداد الدقيق ، بهدف قطره غيض ماصة بين 8 و 10 ميكرون. نحن نستخدم خيوط المحتوية على أنابيب زجاجية البورسليكات مع القطر الخارجي ?…
Discussion
الطريقة الموصوفة أعلاه هو تعديل لأسلوب الموصوفة سابقا لتقديم الأصباغ محبة للدهون لمجموعات فرعية صغيرة أو خلية واحدة 3 الأسلاف. له ثلاث مزايا رئيسية على تقنية electroporation القياسية. أولا ، أنه يوفر وسيلة لوضع العلامات الثقة مع مواقع منفصلة في الأنسجة المستهدفة ، مم?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
نشكر شلومي Krispin للصورة الأنبوب العصبي. على وجه الخصوص ، ونحن نعترف يوفال القرفة لبدء تقنية ترنسفكأيشن GFP. وأيد هذا العمل من المنح المقدمة من مؤسسة العلوم إسرائيل ، ورابطة مناهضة فرانسيز ليه الاعتلالات العضلية ، ودويتشه Forschungsgemeinshaft ، مركز البحوث التعاونية ل488 CK