وحيد الخلية في الأجنة ترنسفكأيشن الفرخ
Summary
استخدام غيض غرامة micropipettes نحن حقن الحمض النووي البلازميد في المجالات الفرعية من somites الدجاج أو أنابيب العصبية. يتم ضبط تركيز البلازميد لتوليد خلايا transfected واحد. ثم نسمح لتطوير الخلايا في نسيلي السكان.
Abstract
وثمة موضوع محوري في البيولوجيا التطورية هو تنويع الأنساب والكشف عن الآليات الجزيئية الكامنة وراءها. هذا ينطوي على تحليل دقيق لمصير الخلايا واحد في ظل الظروف العادية والتجريبية. تحقيقا لهذه الغاية ، وأساليب ترنسفكأيشن التي تستهدف الأسلاف واحد ، هو شرط مسبق. نحن هنا وصف طريقة بسيطة من الناحية الفنية لtransfecting الخلايا في الأنسجة واحدة الدجاج داخل البيضة ، مما يتيح تتبع النسب موثوق بها ، فضلا عن التلاعب الجيني. وتستهدف مجالات محددة داخل النسيج الجسيدة أو الأنبوب العصبي ، ويتم حقن الحمض النووي مباشرة في ظهارة من الفائدة ، مما أدى إلى ترنسفكأيشن متفرقة من الخلايا واحد. قد تستخدم للصحفيين ، وبالتالي السكان نسيلي أن تعزى لمدة تصل إلى ثلاثة أيام ، ويمكن مقارنة سلوك السكان نسيلي التلاعب وراثيا مع أن من الضوابط. هذا الأسلوب تستفيد من سهولة الحصول على الجنين الفرخ جنبا إلى جنب مع الأدوات التي تبرز للتلاعب الجيني. قارنا ومناقشة مزاياه على طريقة electroporation على نطاق واسع المستخدمة ، والتطبيقات الممكنة واستخدام النماذج في داخل الجسم الحي إضافية واقترحت أيضا. ندعو إلى استخدام هذه الطريقة بمثابة إضافة هامة ومكملة لتعقب النسب الحالية وأدوات التدخل الجيني.
Protocol
Discussion
الطريقة الموصوفة أعلاه هو تعديل لأسلوب الموصوفة سابقا لتقديم الأصباغ محبة للدهون لمجموعات فرعية صغيرة أو خلية واحدة 3 الأسلاف. له ثلاث مزايا رئيسية على تقنية electroporation القياسية. أولا ، أنه يوفر وسيلة لوضع العلامات الثقة مع مواقع منفصلة في الأنسجة المستهدفة ، مم?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
نشكر شلومي Krispin للصورة الأنبوب العصبي. على وجه الخصوص ، ونحن نعترف يوفال القرفة لبدء تقنية ترنسفكأيشن GFP. وأيد هذا العمل من المنح المقدمة من مؤسسة العلوم إسرائيل ، ورابطة مناهضة فرانسيز ليه الاعتلالات العضلية ، ودويتشه Forschungsgemeinshaft ، مركز البحوث التعاونية ل488 CK
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Pipette tubes | Sutter Instrument | B100-75-10 | ||
| Capillaries | Drummond Scientific | 2-000-100 | ||
| Insect needles | Watkins & Doncaster | E6871 | ||
| Pen-Strep solution | Biological Industries | 03-031-1B |
References
- Ben-Yair, R., Kalcheim, C. Lineage analysis of the avian dermomyotome sheet reveals the existence of single cells with both dermal and muscle progenitor fates. Development. 132, 689-701 (2005).
- Ben-Yair, R., Kalcheim, C. Notch and bone morphogenetic protein differentially act on dermomyotome cells to generate endothelium, smooth, and striated muscle. J Cell Biol. 180, 607-618 (2008).
- Cinnamon, Y., Kahane, N., Kalcheim, C. Characterization of the early development of specific hypaxial muscles from the ventrolateral myotome. . Development. 126, 4305-4315 (1999).
- Stark, D. A., Kulesa, P. M. Photoactivatable green fluorescent protein as a single-cell marker in living embryos. Dev Dyn. 233, 983-992 (2005).
- Haas, K., Jensen, K., Sin, W. C., Foa, L., Cline, H. T. Targeted electroporation in Xenopus tadpoles in vivo–from single cells to the entire brain. Differentiation. 70, 148-154 (2002).
- Haas, K., Sin, W. C., Javaherian, A., Li, Z., Cline, H. T. Single-cell electroporation for gene transfer in vivo. Neuron. 29, 583-591 (2001).
- Hewapathirane, D. S., Haas, K. Single cell electroporation in vivo within the intact developing brain. J Vis Exp. , (2008).
- Nagai, T. A variant of yellow fluorescent protein with fast and efficient maturation for cell-biological applications. Nat Biotechnol. 20, 87-90 (2002).
- Sato, Y. Stable integration and conditional expression of electroporated transgenes in chicken embryos. Dev Biol. 305, 616-624 (2007).
